临床分子生物学检验技术实验指导（新版）

近年来，随着科学技术的进步，大量先进仪器和技术的采用，医学检验得到飞速的发展。各种新的检验技术不断涌现，对临床疾病的诊疗越来越重要，作用越来越突出，为人类疾病的诊断、治疗监测、预后判断提供大量新的实验室监测指标。据统计，临床实验室提供的医学检验信息占患者全部诊疗信息的60%以上，医学检验已成为医疗的重要组成部分，被称为临床医学中的“侦察兵”。
《重点学科的教学团队引领，副教授及以上职称的老师占80%，教龄在20年以上的老师占72%。教材编写过程中，全体参编人员进行了充分的研讨，各参编单位高度重视并大力支持教材的编写工作，各主编及参编人员付出了辛勤的劳动，这确保了本套教材的编写质量。
本套教材着重突出以下特点:
(1) 教材定位准确，体现新教学理念，反映新教学成果。紧密联系新的教学大纲和临床实践，注重基础理论和临床实践相结合，体现高素质复合型人才培养的要求。
(2) 适应新世纪医学教育模式的要求，注重学生的临床实践技能、初步科研能力和创新能力的培养。突出实用性和针对性，以临床应用为导向，同时反映相关学科的前沿知识和发展趋势。
（3） 以问题为导向，导入临床案例。通过案例与问题激发学生学习的热情，以学生为中心，以利于学生主动学习。
（4） 纸质与数字融合发展。全套教材采用全新编写模式，以扫描二维码形式帮助老师及学生在移动终端共享优质配套网络资源，通过使用华中科技大学出版社数字化教学资源平台将移动互联、网络增值、慕课等新的教学理念和学习方式融入教材建设中，开发多媒体教材、数字化教材等新媒体教材形式。
本套教材得到了高等学校医学技术类专业教学指导委员会和中国医师协会检验医师分会相关领导和专家，以及各院校的大力支持与高度关注，我们衷心希望这套教材能为高等医药院校医学检验技术专业教学及人才培养做出应有的贡献。我们也相信这套教材在使用过程中，通过教学实践的检验和实际问题的解决，能不断得到改进、完善和提高。

高等医药院校医学检验技术专业创新型系列教材
建设指导委员会临床分子生物学检验技术的高速发展，极大地推动了现代检验医学的进步，临床分子生物学实验室成为临床实验室的一个重要组成部分，临床分子生物学检验项目已广泛应用于感染、遗传、肿瘤等，以及个体遗传标记等方面的检查。为了适应医学检验教育发展的需要，华中科技大学出版社于2013年启动、组织编写了《临床分子诊断学实验》。此书得到了各高校医学检验专业老师和同学们的肯定和认可。由于医学检验技术专业学制的“五改四”，对医学检验教育提出了新要求，华中科技大学出版社于2018年再次启动该书第2版编写工作。为了使教材更能反映专业特点，经编委会研究决定，将第2版实验教材更名为《临床分子生物学检验技术实验指导》，并作为伊正君教授、杨清玲教授等编写的《临床分子生物学检验技术》(理论教材)的配套教材。建议实验教学学时为30～60学时。
为使教材既体现学科发展的趋势和突出临床的应用，又充分考虑各个医药院校的教学实际情况，指导教学改革的发展方向，使教材具有实用性、规范性、兼容性和延展性，第2版在第1版的基础上进行了较大修改和更新。在教材编写内容上，强调基础理论和基础知识的同时，侧重培养学生综合分析问题和解决临床实际问题的能力，使其更好地理解和掌握临床分子生物学检验技术的特点和应用，从而使教材具有广泛的适用性，既是学生在校学习的“临床分子生物学检验技术”的实验指导教材，又可作为学生医院见习、实习及医学科研工作者的重要参考书籍。
本书共分为四章，包含四十六个实验项目。*章主要介绍临床分子生物学检验技术实验基本知识。在*版的基础上，不仅增加了实验室的基本规则，还增加了实验过程学习要求、实验报告撰写要求，以及实验过程质量测评等内容，以适应医学教育发展的要求，提高实践教学形成性评价的可操作性。第二章主要介绍临床分子生物学检验技术基本技能实验。增加了生物芯片技术、生物信息分析技术等实验内容，以提高专业知识技能的全面性。第三章主要介绍临床分子生物学检验技术综合性实验，目的是培养学生综合应用能力和临床实践能力。实验项目较*版有较大的变化，以临床常规开展的项目为主。第四章为临床分子生物学检验技术创新性实验设计，主要为学生开展临床分子生物学方面的研究提供基本的研究方案，培养学生的创新能力。附录为临床分子生物学实验常用试剂与缓冲液的配制。每个实验项目内容包括：教学目标、实验原理、器材与试剂(含自配与试剂盒)、实验操作流程、注意事项、结果分析、临床应用(或临床案例分析)、思考题等。本书可满足具有不同实验室条件的院校使用，方便教师根据实际情况从中选做实验。
在本书编写过程中，得到了广州医科大学、河北北方学院、潍坊医学院等单位的大力支持，编委们以高度的责任感完成了各自的编写任务，付出了辛勤的劳动，在此一并表示衷心的感谢。由于临床分子生物学检验技术发展非常迅速，加之编者水平有限，难免存在不足之处或错误，敬请同行专家及读者批评指正。

近年来，随着科学技术的进步，大量先进仪器和技术的采用，医学检验得到飞速的发展。各种新的检验技术不断涌现，对临床疾病的诊疗越来越重要，作用越来越突出，为人类疾病的诊断、治疗监测、预后判断提供大量新的实验室监测指标。据统计，临床实验室提供的医学检验信息占患者全部诊疗信息的60%以上，医学检验已成为医疗的重要组成部分，被称为临床医学中的“侦察兵”。为了更好地适应医学检验技术专业的教学发展和需求，体现新的教学理念和特色，在认真、广泛调研的基础上，在医学检验技术专业教学指导委员会相关领导和专家的指导和支持下，华中科技大学出版社组织了全国40多所医药院校的200多位老师编写了本套全国高等医药院校医学检验专业“十三五”规划教材。

广州医科大学 ，教授，主任医师，全国高等医药院校临床生物化学与分子诊断学理事会常务理事、广东省医院协会临床实验室管理专业委员会副主任委员、广东省医师协会检验医师分会常委。

*章临床分子生物学检验技术实验基本知识/1
*节临床分子生物学检验技术实验室管理规程/1
第二节临床分子生物学检验技术实验操作基本知识/5
第三节实验操作技能学习要求与考评/9
第二章临床分子生物学检验技术基本技能实验/13
*节核酸的分离与纯化/13
实验一质粒DNA的提取与纯化/13
实验二基因组DNA的分离与纯化/16
实验三RNA的提取与纯化/19
第二节核酸的鉴定与分析/24
实验四紫外吸收法鉴定核酸的浓度和纯度/24
实验五核酸浓度荧光微量检测/27
实验六核酸片段的琼脂糖凝胶电泳/29
实验七核酸片段的聚丙烯酰胺凝胶电泳/32
第三节聚合酶链式反应技术/35
实验八常规PCR检测方法/35
实验九RTPCR检测方法/39
实验十实时荧光定量PCR检测方法/42
第四节印迹技术/47
实验十一Southern blot技术/47
实验十二Northern blot技术/51
实验十三Western blot技术/54
第五节生物芯片技术/59
实验十四基因芯片/59
实验十五蛋白质芯片/64
第六节核酸测序技术/68
实验十六双脱氧链终止测序法/68
实验十七焦磷酸测序法/73
实验十八高通量测序法/75
第七节生物信息分析技术/82
实验十九引物设计方法/82
实验二十序列比对分析/84
实验二十一分子系统发育分析/86
实验二十二基因功能与通路分析/89
第八节分子克隆技术/93
实验二十三感受态细胞的制备/93
实验二十四DNA重组与转化/95
实验二十五重组子的筛选与鉴定/97
实验二十六重组基因的诱导表达与检测/103
第三章临床分子生物学检验技术综合性实验/108
*节感染性疾病的临床分子生物学检验/108
实验二十七乙型肝炎病毒(HBV)基因定量检测/108
实验二十八甲型流感病毒(H1N1)基因定性检测/111
实验二十九人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测/115
实验三十结核分枝杆菌的检测/118
第二节遗传性疾病的分子生物学检验/122
实验三十一地中海贫血基因检测/122
实验三十二肌营养不良相关基因检测/127
实验三十三强直性脊柱炎基因检测/130
实验三十四遗传性耳聋相关基因检测/132
第三节肿瘤疾病的临床分子生物学检验/136
实验三十五Her2基因表达水平分析/136
实验三十六EGFR基因突变检测/140
实验三十七白血病融合基因BCRABL的检测/143
实验三十八循环肿瘤细胞检测/146
第四节药物基因的临床分子生物学检验/151
实验三十九华法林代谢基因检测/151
实验四十叶酸代谢基因检测/154
第五节个体遗传标记和染色体异常的临床分子生物学检验/157
实验四十一STR基因座分型/158
实验四十二HLA基因分型/161
实验四十三21三体异常的分子诊断/163
第四章临床分子生物学检验技术创新性实验/168
实验四十四流感病毒分子流行病学分析/168
实验四十五荧光定量PCR高分辨率熔解曲线分析检测
基因点突变/170
实验四十六荧光素酶报告基因的制备/172
附录常用试剂与缓冲液的配制/174
主要参考文献/179
彩图/183