酶学方法——CRISPR/Cas9、ZFN和TALEN在创建特异性位点改变基因组中的应用
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作者[美] J.A.杜德娜 等 著，[美] J.A.杜德娜 等 编，朱必凤 等 译
出版社科学出版社
ISBN9787030621887
出版时间2019-11
装帧平装
开本16开
定价198元
货号1201992872
上书时间2024-06-02
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目录
第1章 Cas9的体外酶学
1.1 导论
1.2 Cas9表达和纯化
1.3 引导RNA的制备
1.4 内切核酸酶切割分析
1.5 结束语
致谢
参考文献
第2章 采用CRISPR/Cas核酸酶和缩短的引导RNA在人体细胞中靶向基因组编辑
2.1 导论
2.2 方法
利益冲突
参考文献
第3章 TALEN、Cas9和其他基因组编辑酶的特异性测定
3.1 导论
3.2 方法
3.3 结论
致谢
参考文献
第4章 定制重组酶基因组工程
4.1 导论
4.2 靶识别
4.3 重组酶构建
4.4 重组酶活性的测定
4.5 位点特异性整合
4.6 结论
致谢
参考文献
第5章 人细胞基因组工程
5.1 导论
5.2 人基因组结构
5.3 使用可编程核酸酶对人基因编辑的范围
5.4 可编程核酸酶用于人细胞基因组编辑
5.5 使用可编程核酸酶对人类遗传疾病的修复
5.6 使用可编程核酸酶对人非遗传疾病的治疗
5.7 人多能干细胞基因组工程
5.8 可编程核酸酶对人细胞的递送
5.9 切口酶修饰人基因组
5.10 基因编辑人细胞的富集
5.11 结论
致谢
参考文献
第6章 人细胞基因组编辑
6.1 导论
6.2 基因打靶策略
6.3 核酸酶靶位点的选择
6.4 实验规程
6.5 可供选择的方法
参考文献
第7章 活细胞荧光成像技术标记内源性基因位点及使用ZFN、TALEN和Cas9进行分子计算
7.1 导论
7.2 方法
7.3 标记/编辑局限性
7.4 远景
致谢
参考文献
第8章 Cas9切口酶基因组编辑
8.1 导论
8.2 靶选择
8.3 质粒sgRNA构建
8.4 细胞系sgRNA的验证
8.5 细胞收获与DNA提取
8.6 错配酶法SURVEYOR缺失分析
8.7 使用Cas9n HDR和非HDR插入
8.8 HDR和插入事件的分析
8.9 疑难问题解决
致谢
参考文献
第9章 DR-GFP报道基因和Cas9核酸酶分析哺乳动物细胞中断裂和切口诱导同源重组
9.1 导论
9.2 克隆切口酶和Cas9催化死亡变种
9.3 靶位点选择和sgRNA构建的克隆
9.4 细胞转染和流式细胞仪分析
9.5 材料
9.6 结论
参考文献
第10章 获得性CRISPR/Cas9功能基因组筛选
10.1 导论
10.2 高通量筛选载体设计的改良
10.3 sgRNA文库的构建
10.4 引导文库逆转录病毒的转导
10.5 关于筛选设计参数的注意事项
10.6 涉及sgRNA文库池阳性选择筛选“命中”解码
10.7 结论
参考文献
第11章 人多能干细胞基因组快速编辑的iCRISPR平台
11.1 导论
11.2 iCas9hPSC的产生
11.3 用iCRISPR产生敲除hPSC
11.4 用iCRISPR准确改变核苷酸的传代
11.5 用iCRISPR诱导hPSC基因敲除
11.6 结论和前景
致谢
参考文献
第12章 用Cas9DSB和nCas9配对切口产生人体细胞癌症易位
12.1 导论
12.2 材料
12.3 诱导和检测癌症在人细胞中易位方法
12.4 结论
致谢
参考文献
第13章 人类基因治疗的基因组编辑
13.1 导论
13.2 人原代CD4+T细胞B2M的基因组编辑
13.3 用CRISPR/Cas9对人CD34+CCR5中的CCR5打靶
参考文献
第14章 CRISPR/Cas9在大鼠基因组位点特异性突变的产生
14.1 原理
14.2 设备
14.3 材料
14.4 方案
14.5 第1步：sgRNA靶寡核苷酸体外转录
14.6 第2步：Cas9mRNA的体外转录
14.7 第3步：假孕雌性大鼠和单细胞大鼠胚胎的制备
14.8 第4步：单细胞胚胎显微注射和假孕大鼠胚胎移植
14.9 第5步：创建大鼠的鉴定
14.10 第6步：F1代大鼠的产生
参考文献
第15章 单质粒注射在小鼠中CRISPR/Cas9的基因组编辑
15.1 导论
15.2 pX330设计和CRISPR/Cas9质粒构建
15.3 pX330体外验证
15.4 环形质粒注射一步产生突变小鼠
15.5 打靶突变小鼠的筛选
15.6 结论
致谢
参考文献
第16章 CRISPR/Cas9在活细胞中基因组元件成像
16.1 导论
16.2 稳定表达dCas9-GFP细胞系的产生
16.3 使用慢病毒载体表达sgRNA
16.4 非重复序列的标记
16.5 CRISPR检测基因组座的成像
16.6 结论
致谢
参考文献
第17章 热带爪蟾中基于Cas9基因组编辑
17.1 导论
17.2 原理
17.3 方案
17.4 讨论
致谢
参考文献
第18章 斑马鱼中基于Cas9基因组编辑
18.1 导论
18.2 插入/缺失突变的靶向产生
18.3 靶向基因组编辑的其他策略
18.4 前景
致谢
参考文献
第19章 果蝇中基于Cas9基因组编辑
19.1 导论
19.2 基于CRISPR基因组编辑应用和设计考虑
19.3 CRISPR组分的递送
19.4 CRISPR试剂的配制
19.5 突变子的检测
致谢
参考文献
第20章 生殖细胞注射CRISPR/Cas RNA的无转基因基因组编辑
20.1 理论、哲学和实际问题
20.2 设备
20.3 材料
20.4 靶序列识别
20.5 产生sgRNA构造
20.6 sgRNA的体外合成
20.7 hCas9 mRNA体外合成
20.8 sgRNA和mRNA的注射
20.9 CRISPR/Cas突变产生的恢复
参考文献
第21章 拟南芥和烟草中Cas9的基因组编辑
21.1 导论
21.2 Cas9和sgRNA的表达
21.3 双sgRNA引导基因组编辑
21.4 远景
21.5 注释
致谢
参考文献
第22章 工业酵母基因组CRISPRm多元工程
22.1 导论
22.2 质粒设计
22.3 Cas9表达
22.4 引导RNA表达
22.5 筛选方法
22.6 结束语
致谢
参考文献
第23章 Cas9增强功能蛋白质工程
23.1 导论
23.2 方法
23.3 结论
参考文献
内容摘要
《酶学方法》是覆盖生命科学各个分支学科的系列丛书，从抢先发售出版至今，逐渐扩展到生命科学领域各个研究方向的各项前沿技术。该丛书是备受认可并被多次引用的有名工具书，被誉为生物技术实验领域的金准则，已经成为生命科学领域研究人员基本而推荐的参考资料。
《酶学方法——CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN 在创建特异性位点改变基因组中的应用》是《酶学方法》系列丛书第546卷，作者由世界有名大学和研究机构，包括美国麻省理工学院、美国加利福尼亚大学伯克利分校、美国耶鲁大学、荷兰苏黎世大学、美国哈佛大学、美国哈佛医学院、荷兰阿姆斯特丹大学、加拿大麦吉尔大学、美国斯隆-凯特林研究所、法国国家自然博物馆、日本东京大学、美国加利福尼亚大学旧金山分校等的有名科学家组成。《酶学方法——CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN 在创建特异性位点改变基因组中的应用》主要介绍目前基因编辑三大前沿技术，重点介绍被誉为21世纪较具影响力的十大技术之一的CRISPR/Cas基因编辑系统。《酶学方法——CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN 在创建特异性位点改变基因组中的应用》既包含背景知识，同时又包含具体的研究技术及详尽的实验操作步骤，详细介绍了基因编辑技术的原理、研究方案、操作指南、未来发展趋势，以及在基因工程研究领域的作用及潜在的医学（癌症和遗传疾病治疗）和人类健康的应用前景，同时提供了大量的参考文献，是一本新的基因编辑科研专业参考书。《酶学方法——CRISPR/Cas9、ZFN、TALEN 在创建特异性位点改变基因组中的应用》经典专业的背景知识对初学者或研究人员是宝贵的知识来源，详细具体的实验操作指南可以为实验室一线科研人员寻找实验方法节省大量的宝贵时间，提高科研效率。
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