生物化学综合实验

在传统的实验教材中，实验内容多是关于实验的演示和验证，对于每一个实验的原理、步骤等都写得十分具体，学生缺少一定的创新机会，只需要测数据、记录数据即完成实验，不能利用所学知识设计实验并解决一些问题。因此在验证实验基础上，开设综合设计实验，将简单基础实验技能串联起来实现教学与学科、教学与科研的交叉结合，开设一些能结合生产生活实际的综合实验是新时期实验教学发展的趋势，这有利于激发学生的学习兴趣，提高学生自我训练的能力，提高学生创新思维和实际动手能力，充分调动学生的主动性、积极性和创造性。

综合实验教学思路主要为：教师发布实验项目与要求→提示主要实验路线→学生查阅文献并设计实验方案→讨论实验方案→实施实验→记录实验数据撰写论文→各组汇报本组实验结果→学生相互学习。相应于我校综合自主设计实验方法，开放实施实验步骤的教学设计理念，本教材的设计特色在于提供的每一个实验项目都有一定的体系性、递进性与实际应用性。教材提供的针对每一个项目的实验步骤都只是一种参考思路，在实际教学操作过程中，可以要求学生查阅其他资料寻求解决实验的方法，以达到自我学习和自我提升的目的。

本书的主要特点是按照生化物质分类进行实验项目设计。一个实验项目由多个实验组成，完成所有实验后将得到的数据整理成实验论文。我校的生化教学团队结合多年的教学经验、科研项目以及教学实验室的实验平台，在核酸类、蛋白质类、糖类、脂类以及维生素类生化物质中选择设计了实验项目。本书侧重核酸类、蛋白质类综合实验项目的开发，如实验项目：真核生物的分子鉴定，细菌发育树构建与分析，精氨酸激酶和苹果酸脱氢酶的酶活性研究等，以上内容都是从我校的科研成果转化而来。这些实验项目在我校近几年的教学实践中取得了一定的教学成果，体现出了很强的可操作特色。

本教材由谭志文、徐洁皓、汪财生、尹尚军老师共同编写，同时借鉴了兄弟院校的典型综合实验项目，借此机会，在此表示由衷的感谢。

希望本教材能对我国大学的生物技术和生物工程专业的人才培养起到一定的积极作用。由于编者水平有限，书中不足及疏漏之处在所难免，恳请同行与读者批评指正。

编者

2020年10月

《生物化学综合实验》主要介绍了核酸类、蛋白质类、糖类、脂类以及维生素类五类生化物质的综合实验项目。本书侧重介绍核酸类、蛋白质类综合实验项目，如实验项目：真核生物的分子鉴定，细菌发育树构建与分析，精氨酸激酶和苹果酸脱氢酶的酶活性研究。由问题引入式的方法介绍每一项实验，激发学生的兴趣，每一类综合实验又包含多个供学生动手实践的具体实验。本书注重理论与实践的有机结合，内容简明、清晰，可操作性强。

本书主要适用于高等院校的生物技术、生物工程、生物制药、生物科学等专业教学使用，也可供生物化学相关研究人员参考。

谭志文，浙江万里学院，副教授，浙江万里学院。作者主要承担浙江万里学院生物技术、生物工程、生物制药专业的教学课程，主要包括：1.《生化实验技术》2011-2019； ；总学时：864。作者讲授《生物化学综合实验》，经过了一系列的建设过程，实现了“基础技能—综合应用设计—研发创新”三模块教学内容体系。2008年，该课程被列为“浙江省精品课程”进行建设；2009年，本课程被列为“国家精品课程”进行建设等。

绪论1

章核酸类综合实验5

项目一真核生物的分子鉴定5

实验一黄酒酵母形态学观察6

实验二黄酒酵母的分子生物学鉴定7

项目二原核生物——细菌的系统发育关系分析12

实验一细菌基因组的提取及琼脂糖凝胶电泳15

实验二细菌16S rDNA序列的PCR扩增16

实验三16S rDNA-ITS基因片段的纯化17

实验四16S rDNA重组载体的构建与转化19

实验五阳性克隆的筛选20

实验六系统发育树构建21

项目三全基因组的提取及效果评价——以火龙果为例27

实验一火龙果基因组的提取29

实验二火龙果基因组的ISSR PCR扩增31

项目四植物转基因成分的检测33

实验一大豆基因组的提取36

实验二定性PCR检测37

项目五真核生物RNA的提取及分析——以脊尾白虾为例40

实验一脊尾白虾的RNA提取41

实验二RNA电泳42

第二章蛋白质类综合实验45

项目一终止法测定酶活性——以酵母蔗糖酶为例45

项目二连续法测定酶活性——以碱性磷酸酶为例47

项目三细菌苹果酸脱氢酶的研究50

实验一苹果酸脱氢酶活力测定52

实验二苹果酸脱氢酶的提取纯化54

实验三苹果酸脱氢酶的电泳检测55

实验四苹果酸脱氢酶适pH值的测定57

实验五苹果酸脱氢酶适温度的测定57

实验六米氏常数及反应速度的测定58

项目四脊尾白虾精氨酸激酶的分离纯化与酶学性质研究60

实验一精氨酸激酶的提取与分离纯化60

实验二精氨酸激酶的活性测定63

实验三精氨酸激酶的酶学性质测定64

项目五鸡卵黄免疫球蛋白的分离纯化与活性测定66

实验一IgY粗品制备及纯化67

实验二蛋白质浓度测定（一）69

实验三蛋白质浓度测定（二）71

实验四免疫球蛋白的活性测定72

项目六固定化葡糖异构酶生产果葡糖浆及评价74

实验一固定化葡糖异构酶生产果葡糖浆75

实验二固定化葡糖异构酶的评价指标78

第三章糖类综合实验81

项目一海藻多糖研究81

实验一海藻多糖提取82

实验二海藻多糖的含量测定84

实验三还原糖的测定85

实验四海藻多糖的单糖成分分析88

实验五海藻多糖的红外光谱分析89

实验六多糖清除·OH能力测定90

实验七多糖的铁离子还原能力测定91

实验八多糖清除DPPH·能力测定92

项目二食用菌多糖的提取与分离纯化——以平菇为例94

第四章脂类综合实验——植物油脂的研究98

实验一杏仁油脂的提取101

实验二油脂皂化价的测定102

实验三油脂酸价的测定104

实验四油脂碘值的测定105

实验五油脂过氧化值的测定106

实验六油脂脂肪酸的气相色谱分析108

第五章维生素类综合实验110

项目一吡咯喹啉醌的研究110

实验一PQQ的提取纯化111

实验二PQQ的高效液相分析112

实验三NBT-Gly法测定PQQ含量113

项目二紫外分光光度法测定维生素C含量114

附录118

附录一常用仪器使用方法118

附录二常用缓冲溶液的配制方法127

附录三硫酸铵饱和度表133

附录四化学试剂规格134

参考文献136

《生物化学综合实验》主要介绍了核酸类、蛋白质类、糖类、脂类以及维生素类五类生化物质的综合实验项目。本书侧重介绍核酸类、蛋白质类综合实验项目，如实验项目：真核生物的分子鉴定，细菌发育树构建与分析，精氨酸激酶和苹果酸脱氢酶的酶活性研究。由问题引入式的方法介绍每一项实验，激发学生的兴趣，每一类综合实验又包含多个供学生动手实践的具体实验。本书注重理论与实践的有机结合，内容简明、清晰，可操作性强。

本书主要适用于高等院校的生物技术、生物工程、生物制药、生物科学等专业教学使用，也可供生物化学相关研究人员参考。

谭志文，浙江万里学院，副教授，浙江万里学院。作者主要承担浙江万里学院生物技术、生物工程、生物制药专业的教学课程，主要包括：1.《生化实验技术》2011-2019； ；总学时：864。作者讲授《生物化学综合实验》，经过了一系列的建设过程，实现了“基础技能—综合应用设计—研发创新”三模块教学内容体系。2008年，该课程被列为“浙江省精品课程”进行建设；2009年，本课程被列为“国家精品课程”进行建设等。