医学生物化学与分子生物学实验技术
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作者王玉明主编
出版社清华大学出版社
ISBN9787302467205
出版时间2017-07
装帧平装
开本16开
定价39.8元
货号9002970
上书时间2024-11-20
商品详情
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目录
第 1章 如何在分子水平研究生命 ....... 1
第 1节分子实验技术简史 ...................... 1
第 2节分子实验技术体系
...................... 4
一、生物分子的分析鉴定 ...................4
二、生物分子的人工合成 ...................5
三、生物分子的人工改造 ...................5
四、生物分子的功能研究 ...................6
第 3节分子实验技术应用 ...................... 7
一、电泳技术在临床检验中的应用
...............................................7
二、 DNA重组技术在医药卫生领域的扩展 ...................................7
三、基因诊疗技术在未来医学的前景
...............................................8
四、动物模型在医学研究中的重要地位
.........................................................9
第 2章 从组织中分离纯化生物大分
子——大分子制备技术 .......... 10
第 1节材料预处理及细胞的分离 ........ 11
一、选择材料及预处理 .....................11
二、细胞的分离 .................................11
第 2节细胞破碎及细胞器分离 ............ 12
一、细胞的破碎 .................................12
二、细胞器的分离 .............................13
第 3节大分子的分离纯化与测定 ........ 13
一、蛋白质的分离纯化 .....................13
二、核酸的分离纯化 .........................14
三、蛋白质浓度的测定 .....................15
四、核酸的浓度、纯度及完整性
测定 .............................................17
第 4节生物大分子提纯后的处理 ........ 18
一、大分子样品的浓缩 .....................18
二、大分子样品的干燥 .....................18
三、大分子样品的保存 .....................19
第 5节实验练习 .................................... 20
一、蛋白质的盐析与透析 .................20
二、蛋白质含量测定 ........................21
第 3章 测定物质的吸收光谱——分光
光度技术 .................................... 24
第 1节 分光光度技术的基本原理 ........ 24
一、光的性质 .....................................24
二、光谱 .............................................25
三、 Lambert-Beer定律 .....................26
第 2节 分光光度计的基本结构 ............ 27
一、光源 .............................................28
二、分光系统 .....................................28
三、样品室 .........................................29
四、检测器 .........................................29
五、显示器 .........................................30
第 3节 常用分光光度计的使用方法 .... 30
一、 721型分光光度计 ......................30
二、 721e型分光光度计 ....................31
三、 722s型分光光度计 ....................31
四、 SP-756紫外 -可见分光光度计 ...31
第 4节 分光光度技术的应用 ................ 31
一、溶液的定性分析 .........................32
二、溶液的定量分析 .........................32
第 5节 实验练习 .................................... 33
一、蛋白质的定量测定 .....................33
二、脲酶 Km值测定 ..........................37
三、血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（赖氏法） ...........................40
四、血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法） ................................42
五、激素对血糖浓度变化的影响 .....43
六、血浆高密度脂蛋白 -胆固醇的测定 .........................................45
七、紫外分光光度法检测核酸的浓度及纯度 .............................46
第 4章 将混合物中各种组分分开——
层析技术 .................................... 48
第 1节 层析技术概述 ............................ 48
一、层析技术的形成和发展 .............48
二、层析技术的基本原理 .................49
三、层析技术的分类 .........................49
四、层析技术的基本要求 .................50
第 2节 吸附层析 .................................... 50
一、吸附层析的原理 .........................50
二、吸附层析的操作 .........................50
第 3节 分配层析 .................................... 52
一、纸层析的原理 .............................52
二、纸层析的操作 .............................52
第 4节 凝胶过滤层析 ............................ 54
一、凝胶过滤层析的原理 .................54
二、凝胶过滤层析的特征常数 .........54
三、凝胶过滤层析的常用介质 .........55
四、凝胶过滤层析的操作 .................56
五、凝胶过滤层析的应用 .................57
第 5节 离子交换层析 ............................ 57
一、离子交换层析的原理 .................57
二、离子交换剂 .................................58
三、离子交换层析的操作 .................59
四、离子交换层析的应用 .................61
第 6节 亲和层析 .................................... 61
一、亲和层析的原理 .........................61
二、亲和层析的操作 .........................62
第 7节 实验练习 .................................... 63
一、氨基酸的分离鉴定——纸层
析法 .............................................63
二、转氨酶的活性鉴定——薄层层析法 .............................................64三、核苷酸的分离——离子交换柱层析法 .........................................65四、胰蛋白酶的分离纯化——亲和层析法 .........................................67五、血清蛋白质的层析分离——分子筛层析法 .............................68
第 5章 分离带电颗粒的有效手段——
电泳技术 .................................... 69
第 1节 电泳技术概述 ............................ 69
一、电泳技术的形成和发展 .............69
二、电泳技术的基本原理 .................70
第 2节 影响电泳的因素 ........................ 71
一、溶液的 pH...................................71
二、缓冲液的离子强度 .....................71
三、电场强度 .....................................72
四、电渗作用 .....................................72
第 3节 常用电泳技术 ............................ 72
一、纸电泳和醋酸纤维素薄膜
电泳 .............................................72
二、凝胶电泳 .....................................73
三、等电聚焦电泳 .............................75
四、双向电泳 .....................................76
五、核酸电泳 .....................................77
六、印迹转移电泳 .............................79
第 4节 实验练习 .................................... 79
一、血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 .............................................79二、血清乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖凝胶电泳 .................................81三、血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
...........................................82四、 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量 .........83五、 DNA琼脂糖凝胶电泳 ...............86六、限制性内切酶对质粒 DNA酶切产物的电泳鉴定 .................87
VII …………
目 录
第 6章 利用离心场沉降大分子——
离心技术 .................................... 90
第 1节离心技术的基本原理 ................ 90
一、颗粒沉降的原理 .........................90
二、沉降系数 .....................................91
三、相对离心力 .................................91
第 2节 离心机的类型及操作规程 ........ 91
一、离心机的类型 .............................91
二、制备型离心机 .............................92
三、分析型离心机 .............................94
四、离心操作的注意事项 .................94
第 3节 制备型超速离心的分离方法 .... 95
一、差速沉降离心法 .........................95
二、密度梯度区带离心法 .................95
三、等密度梯度区带离心法 .............96
第 4节 实验练习 .................................... 96
一、肝糖原的提取和鉴定 .................96
二、酪蛋白的制备 .............................97
三、动物肝脏 DNA的提取 ..............98
四、酵母 RNA的提取及成分
鉴定 ...........................................100
五、质粒 DNA的提取与鉴定 ........101
六、感受态细菌的制备及质粒
DNA的转化
.............................104
七、蔗糖密度梯度离心分离
病毒 ...........................................106
第 7章 利用碱基互补探查核酸序列——分子杂交技术 ............ 109第 1节 核酸分子杂交的基本原理 ...... 109一、变性与复性 ...............................109二、建立在 DNA变性与复性基础上的核酸杂交技术 ...................110第 2节 核酸分子杂交的主要类型及程序 ...........................................111一、固相杂交的支持物
...................111二、常用的转移方法 .......................112三、固相杂交的基本程序
...............112四、固相杂交的主要类型 ...............113
第 3节 核酸探针的分类和标记 .......... 114
一、核酸探针的分类 .......................114
二、核酸探针的标记 .......................115
第 4节 实验练习 .................................. 117
一、 Southern杂交 ...........................117
二、 Northern杂交 ...........................118
三、组织原位杂交 ...........................120
四、斑点杂交 ...................................121
第 8章 微量 DNA的体外扩增——
PCR技术
................................. 123
第 1节 PCR技术概述 ......................... 123
一、基本原理 ...................................123
二、主要步骤 ...................................123
三、主要特点 ...................................124
第 2节 PCR的反应体系及操作 ......... 125
一、 PCR反应体系 ..........................125
二、 PCR的操作及注意事项 ..........125
三、 PCR反应条件的优化 ..............127
四、 PCR产物的检测分析 ..............128
第 3节 PCR的衍生技术 ..................... 128
一、逆转录 -PCR.............................128
二、实时荧光定量 PCR ..................129
三、特殊 PCR ..................................130
第 4节 PCR技术的应用 ..................... 132
一、分子生物学领域 .......................132
二、临床医学领域 ...........................133
三、其他领域 ...................................134
第 5节 实验练习 .................................. 134
逆转录 PCR ......................................134
第 9章 阅读遗传步——测序技术 .................................. 137第 1节 DNA测序的基本原理
............ 137第 2节 DNA测序的常用方法 ............ 138一、酶学法——双脱氧链终止法 .......................................138二、化学（裂解）法——
Maxam-Gilbert测序法 ..........................140
三、酶学法与化学法的比较 ...........141第 3节 DNA测序自动化 .................... 143第 4节实验练习
.................................. 144双脱氧链终止法测定 DNA序列 ....144
转基因技术 ........................... 147
第 1节转基因技术概述 ...................... 147
一、转基因动物技术的原理 ...........147
二、转基因动物技术的成果 ...........148
第 2节建立转基因动物的方法 .......... 149
一、目的基因的制备 .......................149
二、转基因动物的制备方法 ...........149
三、转基因小鼠 ...............................156
第 3节转基因动物的应用 .................. 156
一、研究基因的结构和功能及其表达与调控 ...............................156二、建立人类疾病动物模型
...........157三、研究人类疾病基因治疗 ...........157四、利用转基因动物生产生物活性蛋白 ...................................157五、利用转基因动物生产人用器官移植的供体 .......................158六、利用转基因技术改良动物品种和生产性能
.......................158第 4节转基因的安全性问题 .............. 159一、转基因生物的安全性 ...............159二、转基因食品的安全性 ...............159第 5节实验练习 .................................. 160
一、转基因动物技术中外源基因的制备 .......................................160二、显微注射
...................................161
第 11章 置换生物体的某种基因——基因打靶技术 ....................... 165第 1节基因敲除技术概述
.................. 165一、基因敲除技术的建立和发展 ...........................................165二、基因敲除的基本原理
...............167第 2节基因敲除的方法及进展 .......... 170
一、条件性基因敲除法 ...................170
二、诱导性基因敲除法 ...................171
三、利用随机插入突变进行基因
敲除 ...........................................171
第 3节基因敲除小鼠的制备过程 ...... 174
一、目标载体的构建 .......................174
二、 ES细胞培养 .............................174
三、 ES细胞的转化 .........................175
四、挑克隆 .......................................175
五、抗性 ES细胞克隆的冻存 ........175
六、 ES细胞基因组 DNA的
提取 ...........................................175
七、克隆的分析和鉴定 ...................175
八、染色体分析 ...............................176
九、嵌合体小鼠的制备 ...................176
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