精编免疫学实验指南

图书标准信息

• 作者 [美]科利根 著；曹雪涛 译
• 出版社 科学出版社
• 出版时间 2009-01
• 版次 1
• ISBN 9787030219978
• 定价 158.00元
• 装帧 精装
• 开本 16开
• 纸张 胶版纸
• 页数 802页
• 字数 1188千字
• 正文语种 简体中文
• 丛书 生命科学实验指南系列

【内容简介】

　　本书是国际权威的生命科学实验方法学丛书之《现代免疫学方法》的精华版，共15章。分别介绍了多克隆抗体和单克隆抗体的制备、纯化和鉴定，人和小鼠T细胞、B细胞、NK细胞、树突细胞、巨噬细胞等及其亚群的分离、鉴定和各种功能分析，T细胞、B细胞克隆和T细胞杂交瘤的构建，细胞因子及其受体和分泌细胞因子细胞的检测，免疫细胞活化的信号分子分析，用分子生物学方法制备Fv、构建噬菌体抗体库和研究TCR等免疫分子等。还介绍了构建自身免疫病、炎症性疾病和感染性疾病等的动物模型的方法。本书内容涵盖目前免疫学常用实验技术的基本原理、标准方案和最新进展，具有简明规范、步骤清晰、可行性强等特点。
　　本书可供免疫学、医学基础研究工作者以及临床实验工作者参考使用。

【目录】

前言
第一章免疫应答导论
单元1.1酶联免疫吸附试验
基本方案间接ELISA法检测特异性抗体
备选方案1直接竞争ELISA法检测可溶性抗原
备选方案2抗体夹心ELISA法检测可溶性抗原
备选方案3双抗体夹心ELISA法检测特异性抗体
备选方案4夹心ELISA法检测同种型
备选方案5直接细胞ELISA法检测细胞表面抗原
备选方案6间接细胞ELISA法检测抗细胞表面抗原的特异性抗体
辅助方案十字交叉连续稀释分析法（criss-crossserial-dilutionanalysis）测定试剂最适浓度

单元1.2多克隆抗血清的制备
基本方案使用弗氏佐剂制备多克隆抗体的免疫接种法
备选方案使用其他佐剂制备多克隆抗体的免疫接种法
辅助方案从血液中制备血清

单元1.3单克隆抗体的制备
基本方案1单克隆抗体制备中的免疫接种
基本方案2细胞融合与杂交瘤分选
辅助方案1杂交瘤培养上清的筛选分析
辅助方案2杂交瘤的建系
辅助方案3有限稀释克隆法
辅助方案4克隆和扩增用培养基的制备

单元1.4单克隆抗体培养上清与腹水的制备
基本方案1单克隆细胞培养上清的制备
备选方案1单克隆细胞培养上清的大规模制备
备选方案2杂交瘤或细胞系细胞的大规模制备
基本方案2含有单克隆抗体的腹水制备

单元1.5免疫球蛋白G（IgG）的纯化
基本方案1硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析
基本方案2蛋白A交联琼脂糖凝胶亲和层析
备选方案1蛋白G交联琼脂糖凝胶亲和层析
备选方案2抗大鼠κ链单克隆抗体交联琼脂糖凝胶亲和层析

单元1.6免疫球蛋白G（IgG）片段的水解
基本方案1木瓜蛋白酶水解IgG成Fab片段摸索性试验
基本方案2木瓜蛋白酶水解IgG获取Fab片段的大量制备
基本方案3胃蛋白酶水解IgG成F（ab′）2片段的摸索性试验
基本方案4胃蛋白酶水解IgG获取F（ab′）2片段的大量制备
备选方案用预先活化的木瓜蛋白酶水解IgG制备F（ab）2

单元1.7免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白D（IgD）的纯化
基本方案1用透析和凝胶过滤层析法纯化IgM
备选方案1硫酸铵沉淀法纯化IgM
备选方案2甘露聚糖结合蛋白亲和纯化IgM
备选方案3IgM纯化试剂盒
基本方案2凝集素亲和层析法纯化小鼠IgD

单元1.8抗体可变区（V区）的克隆、表达和修饰
基本方案1通过使用冗余引物克隆和表达免疫球蛋白可变区
辅助方案TA载体的制备
基本方案2用ELISA法鉴定转染细胞分泌的抗体分子
基本方案3转染细胞分泌抗体分子的鉴定

单元1.9核酸免疫
基本方案1小鼠注射接种DNA
基本方案2小鼠基因枪接种DNA
辅助方案1包裹DNA的金粉颗粒的制备
辅助方案2制备包裹有DNA的金粉颗粒的样品管
辅助方案3基因枪接种中氦气压力和颗粒大小的最优化

第二章小鼠淋巴细胞功能的体内体外分析
单元2.1小鼠单个核细胞的分离
基本方案从脾脏、胸腺和淋巴结制备细胞悬液
辅助方案1去除脾脏细胞悬液中的红细胞
辅助方案2一步梯度法去除死细胞

单元2.2磁珠法分离T细胞和B细胞
基本方案1用AUTOMACS系统进行总T细胞、CD4+细胞或CD8+T细胞的自动分离
基本方案2使用AUTOMACS系统进行B细胞的自动分选
基本方案3使用AUTOMACS系统进行辅助细胞的自动分选
备选方案1用磁性分选柱手工操作分离淋巴细胞
基本方案4用AUTOMACS系统自动分选CD4+CD25+抑制性细胞
备选方案2用磁性分选柱手工操作分离CD4+CD25+抑制性细胞

单元2.3树突细胞的分离
基本方案1塑料黏附和EA玫瑰花结富集DC
辅助方案胶原酶消化制备脾脏细胞悬液
基本方案2用小鼠骨髓前体细胞培养树突细胞（DC）

单元2.4从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞
基本方案

单元2.5B细胞功能的检测
基本方案1抗原特异性的抗体产生
基本方案2Jerne-NordinPFC测定法
基本方案3Cunningham-SzenbergPFC测定法
备选方案1改良Jerne-NordinPFC测定法用于型特异性反应
备选方案2改良Jerne-NordinPFC测定法用于测定多克隆抗体反应
辅助方案1制备琼脂糖包被的玻片
辅助方案2制备Cunningham-Szenberg小室
辅助方案3三硝基苯半抗原（TNP）偶联SRBC
辅助方案4蛋白质A偶联SRBC
辅助方案5制备TNP-卵白蛋白
辅助方案6用Percoll梯度离心纯化静息B细胞

单元2.6B淋巴细胞活化的早期事件
基本方案1BCR诱导的B细胞内钙变化
基本方案2蛋白质酪氨酸磷酸化的分析
基本方案3细胞大小与B细胞活化分子表达的分析

单元2.7B细胞功能的增殖检测方法
基本方案抗IgM与LPS刺激的B细胞增殖
备选方案1用8-巯基喹啉（8-MG）刺激B细胞多克隆活化
备选方案2用蛋白激酶C激活剂及钙离子载体刺激B细胞多克隆活化
备选方案3硫酸葡聚糖与poly（I∶C）刺激B细胞多克隆活化
备选方案4细胞数量增加的定量

单元2.8BrdU检测T细胞和B细胞增殖
基本方案

单元2.9采用细胞内荧光染料CFSE检测淋巴细胞的迁移和增殖
基本方案淋巴细胞的CFSE标记
辅助方案流式细胞仪分析CFSE标记的细胞

单元2.10细胞毒性T淋巴细胞的诱导及检测
基本方案1从CTL前体中诱导细胞毒性
基本方案2铬释放法分析CTL活性
辅助方案1次要组织相容性抗原的小鼠体内应答
辅助方案2病毒抗原体内免疫小鼠
辅助方案3TNP修饰靶／刺激细胞
辅助方案4病毒感染靶／刺激细胞
备选方案1多克隆CTL活性的诱导
备选方案2CTL再定向杀伤活性的检测

单元2.11T淋巴细胞增殖实验
基本方案1未致敏T淋巴细胞的活化
备选方案1用抗体激活未致敏的T细胞
备选方案2混合淋巴细胞增殖实验
辅助方案1从抗原呈递细胞或刺激细胞悬液中剔除T淋巴细胞
辅助方案2辅助／刺激细胞的灭活
基本方案2致敏T细胞的活化
基本方案3CD4+CD25+T细胞的活化和抑制功能的检测
备选方案3CD4+CD25+T细胞抑制功能的两步法检测：短期活化和扩增CD4+CD25+T细胞并分析其抑制功能

单元2.12T细胞克隆的建立
基本方案1产生和维持同种反应性Th和CTL克隆
基本方案2用可溶性蛋白抗原诱导Th克隆
辅助方案1制备刀豆蛋白A活化的上清（ConA上清）
辅助方案2制备混合淋巴细胞培养上清（MLC上清）
辅助方案3制备PMA激活的EL-4淋巴瘤细胞上清（EL-4上清）
辅助方案4用显微操作的方法克隆

单元2.13制备小鼠T细胞杂交瘤
基本方案细胞融合和T细胞杂交瘤的选择
辅助方案1筛选表达CD3-TCR原始杂交瘤
辅助方案2筛选抗原特异性的杂交瘤

单元2.14检测凋亡和其他形式的细胞死亡
基本方案1用活细胞或荧光染料定量细胞活性
基本方案2DNA裂解片段的定量
备选方案计数放射性标记的DNA定量细胞中DNA片段
辅助方案1用125IUdR和51Cr放射性标记细胞核
辅助方案2用3HTdR放射性标记细胞核

第三章细胞活化的生物化学
单元3.1淋巴细胞活化过程中肌醇磷脂周转的分析
基本方案1通过道威克斯（DOWEX）离子交换层析分析［3H］肌醇磷酸
备选方案通过HPLC方法分析［3H］肌醇磷酸
基本方案2通过薄层层析方法分析肌醇磷脂

单元3.2抗磷酸化酪氨酸的印迹检测
基本方案抗磷酸化酪氨酸印迹检测的准备及分析
备选方案使用125I标记蛋白A进行检测

单元3.3免疫复合物方法检测酪氨酸蛋白激酶
基本方案酪氨酸蛋白激酶的免疫沉淀和自身磷酸化检测
备选方案1蛋白激酶对外源底物的磷酸化检测
备选方案2蛋白激酶对外源底物的磷酸化检测

单元3.4识别特异性酪氨酸磷酸化多肽抗体的制备
基本方案1多克隆抗磷酸肽抗体的制备
基本方案2制备抗磷酸肽的单克隆抗体
辅助方案1肽的合成
辅助方案2肽段偶联到Affi-Gel10亲和性基质
辅助方案3磷酸酪氨酸偶联到Affi-Gel10亲和基质

单元3.5T细胞中丝裂原活化的蛋白激酶（MAPK）活性分析
基本方案1免疫复合物蛋白激酶测定
基本方案2固相蛋白激酶法检测JNK活性
基本方案3SDS-PAGE后原位检测JNK蛋白激酶活性［“胶内”（IN-GEL）激酶测定］
基本方案4利用磷酸化位点特异性抗体检测MAPK的活化
辅助方案制备GST-MAPK底物融合蛋白

单元3.6脂筏的分离和应用
基本方案通过蔗糖梯度浮选法制备去污剂抗性的膜并通过免疫印迹对蛋白质进行分析
备选方案用离心法制备去污剂抗性的膜
辅助方案1脉冲追踪方法分析去污剂抗性的膜蛋白
辅助方案2通过放射性标记检测去污剂抗性的膜蛋白的全部组分
辅助方案3定量高效薄层色谱法（HP-TLC）进行DRM脂质分析
辅助方案4DEAE葡聚糖凝胶的制备
辅助方案5C18反相色谱柱的制备
辅助方案6用甲基-β-环式糊精去除胆固醇来破坏脂筏
辅助方案7甲基-β-环式糊精（MBCD）处理去除胆固醇的动力学测定
辅助方案8使用MBCD-胆固醇复合物进行细胞胆固醇去除

第四章免疫荧光和细胞分离
单元4.1细胞制备和试剂
基本方案1单细胞表面抗原的免疫荧光标记
基本方案2固定和渗透单细胞的细胞内抗原的免疫荧光标记
辅助方案1用异硫氰酸荧光黄（FITC）偶联抗体
辅助方案2长臂生物素偶联抗体
备选方案1未固定细胞胞内抗原的免疫荧光检测
备选方案2用7-氨基放线菌素D（7-AAD）标记死细胞

单元4.2流式细胞仪分析技术-BD公司出品的流式细胞仪
基本方案FITC偶联抗体的单色分析
辅助方案1用校准微球和FACSComp软件进行仪器检测
辅助方案2单色分析区分活细胞和死细胞
备选方案1FITC和PE偶联抗体的双色分析
辅助方案3双色分析区分活细胞和死细胞
备选方案2三色分析
备选方案3四色分析

第五章细胞因子及其受体
单元5.1IL-2和IL-4的检测
基本方案采用CTLL-2细胞检测小鼠IL-2和IL-4
备选方案1采用CTLL-2细胞检测人IL-2
备选方案2采用CT.4S细胞检测小鼠IL-4
备选方案3采用CT.h4S细胞检测人IL-4
辅助方案1白细胞介素或T细胞生长因子（TCGF）单位的计算
辅助方案2小鼠CTLL-2细胞的维持
辅助方案3小鼠CT.4S细胞的维持
辅助方案4小鼠CT.h4S细胞的维持

单元5.2IL-10的检测
基本方案

单元5.3IL-12的检测
基本方案人和小鼠IL-12p75异二聚体的ELISA检测方法
备选方案人和小鼠IL-12p40亚基的ELISA检测

单元5.4IL-13的检测
基本方案

单元5.5IL-15的检测
基本方案

单元5.6IL-18的检测
基本方案

单元5.7γ干扰素的检测
基本方案

单元5.8流式细胞仪检测细胞内因子
基本方案细胞内因子的荧光标记
辅助方案1PMA和ionomycin激活T细胞
辅助方案2抗原活化T细胞
辅助方案3固定和冻存PBMC
辅助方案4PBMC的细胞表面标记
辅助方案5用荧光标记的抗细胞因子抗体标记活化细胞内的细胞因子

单元5.9流式细胞仪检测细胞因子受体
基本方案用抗受体单克隆抗体检测人和小鼠的细胞因子受体
备选方案1用标记的细胞因子检测细胞因子受体
备选方案2多参数分析检测淋巴细胞亚群细胞因子受体的表达
辅助方案1单克隆抗体和细胞因子的滴定
辅助方案2评价检测试剂

单元5.10用流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离分泌细胞因子的细胞
基本方案细胞因子分泌实验
备选方案1PBMC分泌细胞因子的快速检测
备选方案2全血细胞分泌细胞因子的快速检测

单元5.11ELISPOT方法检测分泌细胞因子的细胞
基本方案

单元5.12α-、β-和γ-干扰素诱导的抗病毒活性的检测
基本方案小鼠干扰素诱导的抗病毒活性的检测
辅助方案1病毒培养体系的建立
辅助方案2抗体中和实验
备选方案人干扰素诱导的抗病毒活性的检测

单元5.13趋化因子超家族的生物学反应
基本方案1微型趋化实验检测趋化因子对粒细胞的趋化
备选方案1微型趋化实验检测趋化因子对单核细胞的趋化
备选方案2微型趋化实验检测趋化因子对淋巴细胞的趋化
辅助方案细胞外基质蛋白包被聚碳酸酯膜
基本方案2趋化因子诱导的淋巴细胞内游离钙离子的检测

第六章天然免疫
单元6.1小鼠巨噬细胞的分离
基本方案1小鼠腹腔巨噬细胞的分离
基本方案2小鼠骨髓巨噬细胞的分离和培养

单元6.2小鼠巨噬细胞的表型检测
基本方案直标法检测小鼠巨噬细胞的表型
备选方案间标法检测小鼠巨噬细胞的表型

单元6.3人单核／巨噬细胞的表型检测
基本方案

单元6.4小鼠巨噬细胞的活化
基本方案小鼠巨噬细胞的活化
辅助方案炎性小鼠巨噬细胞的活化

单元6.5巨噬细胞一氧化氮的检测
基本方案

单元6.6巨噬细胞吞噬功能和杀伤功能的检测
基本方案1巨噬细胞吞噬功能的检测
辅助方案利用FITC区分胞外黏附和胞内吞噬的细菌
基本方案2巨噬细胞杀伤功能的检测
辅助方案单核细胞增多性利斯特氏菌的制备

单元6.7巨噬细胞抗肿瘤活性的检测
基本方案［111In］释放法检测巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用
辅助方案［111In］标记肿瘤靶细胞

单元6.8Fcγ受体介导的黏附作用和吞噬作用的检测
基本方案Fcγ受体介导的吞噬作用
辅助方案FcγR介导的黏附作用

单元6.9干扰素介导的抗肿瘤作用
基本方案

单元6.10人NKT细胞的分离和扩增
基本方案1NKT细胞的鉴定
基本方案2免疫磁珠法分离NKT细胞及后续扩增
备选方案1NKT细胞的流式分选及扩增
备选方案2NKT细胞的克隆
辅助方案NKT细胞的二次刺激和克隆

第七章抗原加工处理和呈递
单元7.1抗原呈递细胞的选择和制备
基本方案通过利斯特氏菌刺激制备腹腔巨噬细胞
备选方案1连续注射利斯特氏菌和蛋白胨后制备腹腔巨噬细胞
辅助方案1小鼠腹腔注射用利斯特氏菌的制备
备选方案2ConA刺激的腹腔巨噬细胞的制备
备选方案3骨髓来源的巨噬细胞的制备
辅助方案2制备L929条件培养基
备选方案4制备LPS刺激的B细胞

单元7.2外源性抗原向T细胞的呈递
基本方案一种抗原加工处理和呈递的检测体系
备选方案1用固定后的贴壁型抗原呈递细胞检测加工处理过的抗原肽
备选方案2用固定后的非贴壁型抗原呈递细胞检测加工处理过的抗原肽
备选方案3蛋白抗原致敏的细胞固定后检测抗原加工和处理

第八章人类免疫学研究
单元8.1外周血和脐带血中分离单个核细胞
基本方案Ficoll-Hypaque梯度离心法分离单个核细胞
辅助方案贴壁法去除单个核细胞中的单核细胞和巨噬细胞

单元8.2T细胞亚群的分离纯化
基本方案间接淘洗法分离T细胞亚群
备选方案抗体依赖补体介导的细胞毒作用分离T细胞亚群
辅助方案1应用神经氨酸酶处理的绵羊红细胞玫瑰花环形成法分离T细胞
辅助方案2应用AET处理的绵羊红细胞玫瑰花环形成法分离T细胞

单元8.3免疫磁珠法纯化T细胞
基本方案

单元8.4免疫磁珠法分离B细胞亚群
基本方案

单元8.5单核细胞／巨噬细胞的分离
基本方案1贴壁法分离单核细胞
基本方案2根据大小沉降作用分离单核细胞
基本方案3对流离心洗淘法分离单核细胞

单元8.6人自然杀伤细胞的分离
基本方案从PBMC分离人NK细胞
辅助方案阴性选择分离NK细胞的单克隆抗体的滴定

单元8.7流式细胞仪检测全血的人淋巴细胞
基本方案

单元8.8淋巴细胞增殖实验
基本方案丝裂原诱导的外周血单个核细胞增殖实验
备选方案1单向混合淋巴细胞反应
备选方案2抗原诱导的T细胞增殖实验
辅助方案3HTdR掺入和细胞收集

单元8.9B细胞分泌抗体的检测
基本方案

单元8.10ELISA检测抗体的含量
基本方案

单元8.11ELISPOT检测抗体的含量
基本方案ELISPOT检测分泌抗体的细胞
备选方案用ELISPOT检测仪检测分泌抗体的细胞

单元8.12抗体的体内诱导和检测
基本方案1蛋白质或多糖抗原体内法诱导抗体的产生
基本方案2ELISA法检测体内抗体的产生
辅助方案肺炎球菌多糖与蛋白质的偶联

单元8.13T细胞杀伤功能的检测
基本方案1抗CD3诱导的T细胞杀伤实验
基本方案2抗原诱导的特异性T细胞杀伤功能的检测

单元8.14NK／LAK细胞杀伤活性的检测
基本方案51Cr释放法检测NK／LAK细胞杀伤活性
辅助方案肿瘤靶细胞的制备和标记

单元8.15人T细胞的克隆和扩增
基本方案1抗原特异性T细胞的诱导
基本方案2Th1或Th2细胞的诱导
辅助方案1T细胞的克隆
辅助方案2克隆后T细胞的扩增
辅助方案3T细胞克隆的冻存

单元8.16制备EBV转化的B细胞
基本方案

单元8.17分离人肠黏膜单个核细胞
基本方案分离人肠黏膜单个核细胞
辅助方案用尼龙毛过滤器去除死细胞

单元8.18人树突细胞分离和培养
基本方案1从外周单个核细胞中分离人树突细胞
备选方案免疫磁珠法分离树突细胞
基本方案2用单核细胞诱导人树突细胞

单元8.19分离和鉴定人自然杀伤细胞亚群
基本方案从PBMC中分离人NK细胞
辅助方案人NK细胞亚群的表型和功能分析

第九章HIV的检测与分析
单元9.1外周血中HIV的分离和定量检测
基本方案1外周血中HIV的培养以及通过TCID定量来测定其滴度
基本方案2感染同种异型T淋巴母细胞：原代分离PBMC中的HIV
辅助方案评估HIV对CD4+靶细胞的致细胞病变效应：HIV介导的细胞死亡

单元9.2感染CD4+原代细胞系及HIV的诱导
基本方案1用HIV体外急性感染CD4+原代细胞及细胞系
基本方案2建立HIV慢性感染细胞系
基本方案3慢性感染细胞系中HIV的诱导

单元9.3在单核细胞和巨噬细胞中培养HIV
基本方案单核细胞来源的巨噬细胞培养和HIV感染
备选方案用HIV悬液感染单核细胞来源的巨噬细胞
辅助方案1扩增实验室保存的亲巨噬细胞的HIV-1病毒株
辅助方案2扩增原代分离的亲巨噬细胞的HIV-1病毒株

单元9.4HIV蛋白的检测
基本方案1免疫印迹法检测HIV蛋白
基本方案2免疫荧光法检测HIV蛋白
备选方案流式细胞仪分析细胞内HIV蛋白
基本方案3HIV反转录酶活性检测

单元9.5用PCR检测HIV的DNA及RNA
基本方案1用PCR扩增及检测HIV的DNA
基本方案2用RT-PCR检测HIV的RNA

单元9.6体外评价各种制剂的抗HIV活性
基本方案1保护靶T细胞免受HIV致细胞病变效应
基本方案2表达CD4的HeLa细胞合胞体斑形成抑制试验
基本方案3ELISA检测抗病毒剂对PBMC中HIVp24抗原产生的抑制作用
辅助方案50%抑制浓度（IC50）的计算

单元9.7基于痘苗病毒报道基因细胞融合检测法定量功能性测定HIV包膜糖蛋白与受体的相互作用
基本方案用质粒表达包膜蛋白及受体进行融合检测
备选方案1用重组病毒对各种成分的融合试验
备选方案2活化的可溶性CD4融合检测
辅助方案1比色法测定融合依赖的报道基因活性
辅助方案2原位染色测定报道基因活性

第十章自身免疫性及炎症性疾病动物模型
单元10.1小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）
基本方案应用PLP和MBP蛋白或多肽主动诱导EAE
备选方案MBP或PLP特异性淋巴细胞被动转移性诱导EAE
辅助方案1PLP蛋白的纯化
辅助方案2MBP蛋白的纯化

单元10.2大鼠佐剂性关节炎
基本方案佐剂性关节炎的诱导
辅助方案分枝杆菌悬液的制备

单元10.3胶原诱导性关节炎
基本方案诱导小鼠胶原性关节炎
辅助方案1II型胶原（CII）的纯化
辅助方案2胶原（II）α1链的纯化
辅助方案3胶原（II）α1链内溴化氰裂解片段的纯化
辅助方案4小鼠关节炎的评定
辅助方案5检测CIA小鼠T细胞对CII的增殖应答

单元10.4小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎
基本方案1实验性自身免疫性甲状腺炎的诱导和评定
辅助方案小鼠甲状腺球蛋白的制备
基本方案2诱导EAT耐受

单元10.5小鼠实验性自身免疫性重症肌无力
基本方案EAMG的诱导和评定
辅助方案1AChR的抽提与亲和纯化
辅助方案2神经毒素3-琼脂糖的制备
辅助方案3应用肌电图评定EAMG
辅助方案4通过检测抗AChR抗体来评定EAMG
辅助方案5小鼠肌肉AChR的制备

单元10.6NOD小鼠：一种胰岛素依赖性糖尿病模型
基本方案1无特殊病原菌（SPF）级NOD小鼠的饲养
基本方案2胰岛素依赖性糖尿病（IDDM）的诊断
备选方案半定量胰岛炎以作为进展为IDDM的亚临床表现
辅助方案胰腺中胰岛细胞的分离

单元10.7通过耗竭调节性T细胞诱导自身免疫性疾病
基本方案通过胸腺切除术诱导年轻的成年大鼠糖尿病
备选方案应用胸腺切除术诱导3周龄大鼠糖尿病

单元10.8通过耗竭调节性T细胞诱导免疫缺陷小鼠炎症性肠道疾病
基本方案转输CD45RBhighCD4+T细胞诱导SCID小鼠IBD
辅助方案监测IBD进展

单元10.9气道高反应性动物模型
基本方案应用OVA全身致敏及气道激发诱导气道超敏反应
辅助方案1使用全身体积气压描记器非侵入性检测气道反应性
备选方案OVA致敏气道诱导气道超敏反应
辅助方案2体外检测气道对电场刺激的反应性
辅助方案3T细胞功能和气道炎症的评定

单元10.10诱导小鼠TNBS结肠炎
基本方案小鼠TNBS结肠炎的诱导和评定
辅助方案1分离小鼠肠系膜淋巴结细胞
辅助方案2分离结肠炎小鼠的黏膜固有层细胞

单元10.11系统性红斑狼疮动物模型
基本方案1ELISA检测小鼠血清中抗染色质抗体
基本方案2单链和双链DNA抗体的检测
基本方案3ELISA检测类风湿因子
基本方案4ELISA检测同种异型特异性抗体时标准曲线的制作
备选方案ELISPOT检测抗染色质抗体形成细胞
辅助方案1低渗裂解鸡红细胞核制备鸡染色质
辅助方案2dsDNA的制备
辅助方案3基于PCR技术的faslpr突变体和fasLgld突变体的基因分型

第十一章传染性疾病动物模型
单元11.1利什曼原虫感染的小鼠模型
基本方案皮肤利什曼原虫病小鼠模型
辅助方案1使用花生凝集素制备后发育期前鞭毛体
辅助方案2从足垫组织中纯化无鞭毛体
辅助方案3前鞭毛体和无鞭毛体的冷藏和复苏
辅助方案4血琼脂培养板的制备

单元11.2弓形虫感染动物模型
基本方案1诱导小鼠急性弓形虫T.gondii感染
基本方案2小鼠慢性弓形虫脑炎模型
基本方案3感染T.gondii的重症联合免疫缺陷小鼠
基本方案4温度敏感的TS-4T.gondii菌株的感染模型
辅助方案1对T.gondii感染进展和免疫应答的评估
辅助方案2ME49T.gondii包囊种子库的维持和保存
辅助方案3用人类包皮成纤维细胞保存T.gondii速殖子
辅助方案4小鼠体内保存T.gondii速殖子
辅助方案5T.gondii裂解物抗原的准备

单元11.3巨细胞病毒感染小鼠模型的建立
基本方案巨细胞病毒感染小鼠模型
辅助方案1巨细胞病毒的准备
辅助方案2唾液腺病毒的制备
辅助方案3用空斑形成细胞试验测定巨细胞病毒滴度
辅助方案4原代小鼠胚胎成纤维细胞的制备

单元11.4单核细胞增生性利斯特氏菌感染动物模型
基本方案用单核细胞增生性利斯特氏菌株感染小鼠
辅助方案1小鼠感染利斯特氏菌后的特异性和固有免疫反应评估
辅助方案2利斯特氏菌特异性T细胞的制备

单元11.5淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒感染动物模型
基本方案1全身性感染LCMV小鼠模型
基本方案2LCMV病毒持续感染小鼠模型
基本方案3T细胞对LCMV免疫反应的测定
基本方案4LCMV疫苗效果的体内检测
辅助方案1LCMV病毒储存液的制备
辅助方案2噬菌斑试验测定LCMV病毒滴度
辅助方案3ELISA检测LCMV抗体

单元11.6流感病毒
基本方案1流感病毒鼻腔内感染麻醉的小鼠
备选方案流感病毒鼻腔内感染未麻醉小鼠
辅助方案1流感病毒在鸡胚中扩增
辅助方案2鸡胚尿囊液内流感病毒滴度的测定
辅助方案3MDCK细胞的长期培养
辅助方案4培养组织流感病毒感染剂量（TCID50）的测定
辅助方案5小鼠50%致死剂量（MLD50）和小鼠50%感染剂量（MID50）
辅助方案6检测流感病毒滴度的小鼠肺脏制备
辅助方案7流感病毒储存液中血凝单位的测定
辅助方案8小鼠血清的血凝抑制试验（HAI）
辅助方案9流感病毒储存液（原液）的系列稀释
基本方案2从脾脏前体细胞获得流感病毒特异性的细胞毒T淋巴细胞（CTL）
基本方案3收集含抗流感病毒CTL的肺脏细胞
辅助方案10流感病毒中和试验

第十二章蛋白质分离和分析
单元12.1免疫亲和层析
基本方案可溶性或膜结合抗原的分离
备选方案1抗原低pH洗脱
备选方案2用辛烷基β-D-葡糖苷洗脱抗原

单元12.2免疫沉淀
基本方案1用非变性去垢剂裂解细胞制成的悬液进行免疫沉淀
备选方案1用含非变性去垢剂溶液裂解的贴壁细胞进行免疫沉淀
备选方案2用含变性去垢剂裂解液裂解的细胞进行免疫沉淀
备选方案3用无去垢剂裂解液裂解的细胞进行免疫沉淀
备选方案4用抗体-Sepharose进行免疫沉淀
辅助方案抗体Sepharose的制备
备选方案5用与ANTI-Ig结合的放射性标记的抗原进行免疫沉淀
基本方案2再次捕获免疫沉淀

单元12.3单向蛋白质凝胶电泳
基本方案

单元12.4凝胶蛋白质染色
基本方案1考马斯亮蓝染色
基本方案2银染
基本方案3SYPROOrange或SYPRORed荧光染色
基本方案4SYPRORuby荧光染色
备选方案1聚丙烯酰胺凝胶上磷蛋白的特异性荧光染色
辅助方案磷酸酪氨酸残基的特异性检测
备选方案2同一块凝胶上的糖基化蛋白和非糖基化蛋白的差异性荧光染色

单元12.5免疫印迹和免疫检测
基本方案1液体容器中的蛋白质印迹
备选方案1半干胶系统蛋白质印迹
辅助方案1转移蛋白的可逆染色
基本方案2采用二抗检测的免疫探针法
备选方案2亲和素生物素化二抗的免疫探针法
基本方案3生色底物显色
备选方案3生色底物显色
辅助方案2膜蛋白解离与再生

第十三章肽
单元13.1合成肽用以制备识别完整蛋白质的抗体
基本方案1通过计算机辅助方法选择合适的抗原肽序列
备选方案1通过人工筛查挑选合适的肽序列
基本方案2设计一条肽链与载体蛋白相偶联
备选方案2设计合成一条多价抗原肽
基本方案3使用双功能团试剂将合成肽偶联至载体蛋白
备选方案3使用双功能团试剂将合成肽偶联至载体蛋白
辅助方案计算肽连接到载体蛋白上的摩尔率

单元13.2抗多肽血清的制备
基本方案1在兔体内制备抗多肽血清的免疫接种流程
基本方案2用间接ELISA法检测抗多肽抗体滴度
基本方案3使用酸性、碱性或离液洗脱液的亲和层析柱
辅助方案1预先溶胀的NHS或CNBr活化树脂的肽免疫亲和层析柱的制备
辅助方案2巯基化树脂填充的肽亲和层析柱的制备

单元13.3采用合成肽组合库鉴定B细胞和T细胞的表位
基本方案1采用PS-SCL筛选抗体抑制剂
基本方案2筛查PS-SCL鉴定CD4+或CD8+T细胞的配体
辅助方案优化用于筛查的抗原和抗体浓度

第十四章分子生物学
单元14.1293T细胞包装和扩增反转录病毒
基本方案1磷酸钙／DNA沉淀瞬时转染Phoenix反转录包装细胞
备选方案1水疱性口炎病毒G蛋白的假型反转录病毒
辅助方案1水疱性口炎病毒G蛋白假型反转录病毒的浓缩和低温储存
辅助方案2Phoenix细胞的培养
基本方案2感染贴壁细胞
备选方案2贴壁细胞快速（spin）感染（见基本方案2）
备选方案3悬浮细胞的快速（spin）感染

单元14.2免疫球蛋白融合蛋白的构建
基本方案1免疫球蛋白融合蛋白的构建
基本方案2免疫球蛋白融合基因分析

单元14.3单链抗体的噬菌体展示技术
基本方案1全套单链抗体噬菌体载体的构建
基本方案2scFv展示噬菌体在抗原包被板上的亲和筛选
备选方案链霉亲和素包被的磁珠富集筛选生物素化抗原结合的scFv展示噬菌体
基本方案3ELISA鉴定抗原结合的scFv展示噬菌体
辅助方案1辅助噬菌体冻存液的配制
辅助方案2指纹图谱和PCR检测克隆的正确性和多样性
辅助方案3蛋白质的生物素化（NHS-SS-生物素）
辅助方案4利用生物素蛋白连接酶使蛋白生物素化

单元14.4整体培养中同型转换重排的PCR检测
基本方案1通过转换接头的直接PCR
辅助方案通过PCR和随机引物标记法制备5′Sμ探针
基本方案2消化环化PCR

单元14.5PCR检测细胞因子mRNA的表达
基本方案定量IL-2mRNA表达水平

单元14.6PCR检测人T细胞受体基因的表达
基本方案PCR检测人T细胞受体基因的表达
备选方案PCR定量检测TCR可变序列转录产物
辅助方案1重排V-D-J区测序
辅助方案2cDNA合成

单元14.7PCR检测小鼠T细胞受体表达
基本方案1PCR分析小鼠TCR基因表达
基本方案2PCR检测小鼠TCR可变区的频率
基本方案3对小鼠可变区转录物进行PCR定量
基本方案4序列分析V（D）J区的接头多样性
辅助方案cDNA合成用于小鼠TCR基因表达的PCR分析

单元14.8TCR库的抗原谱／免疫扫描技术分析
基本方案1人和小鼠TCR受体库多样性的免疫扫描技术分析
备选方案利用［32P］dCTP进行免疫扫描分析
基本方案2链接区引物进行高特异的分光光度分析
基本方案3TCR基因扩增产物的快速高通量测序

单元14.9多探针核糖核酸酶保护试验同时测定mRNA表达
基本方案多探针核糖核酸酶保护试验
辅助方案1构建一个核糖探针模板
辅助方案2凝胶电泳和结果的可视化

单元14.10端粒长度和端粒酶活性的分析
基本方案1Southern杂交检测传统凝胶电泳中末端端粒DNA限制性片段（TRF）的端粒长度
备选方案1尼龙膜上的Southern杂交
辅助方案1端粒或其他寡聚核苷酸末端标记
基本方案2用脉冲电场凝胶电泳法测量端粒
基本方案3荧光原位杂交
基本方案4QFISH
辅助方案2从分裂的淋巴细胞中制备分裂中期染色体
基本方案5端粒酶活性的测定
备选方案2非放射性的TRAP分析方法1：荧光染料（SYBRI）标记
备选方案3非放射性的TRAP分析方法2：荧光染料（TAMRA-TS）标记

第十五章免疫分子与受体工程学
单元15.1用MHC-Ig二聚体检测抗原特异性T细胞
基本方案构建MHCI-Ig二聚体
辅助方案1测定MHC-Ig融合蛋白浓度
辅助方案2J558L转染细胞大规模培养及上清的浓缩
辅助方案3用5-碘-4-羟基-3-硝基酚乙酰-琼脂糖凝胶层析法纯化MHC-Ig二聚体
辅助方案4制备5-碘-4-羟基-3-硝基酚乙酰-琼脂糖凝胶
辅助方案5通过被动交换法为MHC-Ig嵌合蛋白负载多肽
辅助方案6碱洗脱法负载多肽
辅助方案7温和酸性条件下负载多肽
辅助方案8流式细胞分析抗原特异性T细胞

单元15.2用MHC肽四聚体显现抗原特异性T细胞
基本方案1制备带BirA底物标签的MHCI类分子亚单位的包含体
基本方案2MHCI类分子肽复合物的重新折叠
辅助方案1用ELISA测定MHC
辅助方案2用分子大小排阻层析法进行超滤和纯化以浓缩折叠蛋白
基本方案3用酶进行生物素化、纯化及生物素化效率的分析
基本方案4用链亲和素使生物素化的单体形成多聚体
基本方案5用标记的MHCI类分子四聚体通过流式细胞分析含特异性T细胞受体的细胞

附录1试剂与溶液
附录2实验用小鼠、大鼠和仓鼠
附录2A常用小鼠和大鼠品系
附录2B饲养
附录2C处理和捕捉
基本方案1小鼠的处理和捕捉
基本方案2大鼠的处理和捕捉
基本方案3仓鼠的处理和捕捉
备选方案啮齿类动物捕捉器
附录2D麻醉
基本方案1小鼠、大鼠和仓鼠的注射麻醉
基本方案2用甲氧氟烷吸入法麻醉小鼠、大鼠和仓鼠
附录2E腹腔注射
基本方案1小鼠、大鼠和仓鼠的肌肉注射
基本方案2小鼠、大鼠和仓鼠的皮内注射
基本方案3小鼠、大鼠和仓鼠的皮下注射
基本方案4小鼠的静脉注射
基本方案5小鼠、大鼠和仓鼠的腹膜内注射
基本方案6小鼠足垫注射
基本方案7小鼠胸腺内注射
附录2F血液收集
基本方案1小鼠和大鼠的眼眶或眼血管丛取血
基本方案2小鼠和大鼠的尾静脉微量采血管取血
备选方案从小鼠和大鼠的尾静脉以离心管取血
基本方案3小鼠腋窝丛取血
附录2G安乐死
基本方案1二氧化碳窒息
基本方案2过量戊巴比妥注射
备选方案1麻醉下放血
备选方案2小鼠颈椎脱臼
附录2H淋巴器官和胸腺的摘除
基本方案1小鼠淋巴器官的摘除
基本方案2脾切除术
备选方案脾半切除术
基本方案3新生鼠胸腺摘除
基本方案4成年鼠的胸腺摘除术
辅助方案胸腺吸入套管的制备
附录3免疫学常用细胞实验技术
附录3A细胞生长的检测
基本方案1血细胞计数板计数细胞
基本方案2库尔特粒度仪计数细胞
附录3B细胞冻存
基本方案1细胞株或杂交瘤的冻存
基本方案2细胞株或杂交瘤细胞的复苏
附录3C台盼蓝拒染试验检测细胞活力
基本方案
附录3D瑞氏吉姆萨和非特异性酯酶染色
基本方案1瑞氏吉姆萨染色通常用于淋巴细胞形态的研究
基本方案2非特异性酯酶染色
附录3E3HTdR的掺入
基本方案
附录3F判断并处理细胞培养中的支原体污染
基本方案1检测可能存在的支原体污染
基本方案2用BM-cyclin处理污染的细胞
备选方案用环丙沙星处理支原体污染的细胞
附录3G人外周血单个核细胞的分离
基本方案静脉穿刺采集外周血
备选方案淋巴细胞去除法取血
附录4试剂和设备的供应商
参考文献
索引