重组鸡白细胞介素18的基因表达及其免疫原性研究
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作者孔娜，王新华，蒋培红
出版社中国农业科学技术出版社
ISBN9787511641243
出版时间2019-04
版次1
装帧平装
开本32开
纸张胶版纸
页数172页
字数148千字
定价20元
货号SC:9787511641243
上书时间2025-01-09
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作者简介:
孔娜，女，博士，讲师，毕业于山东农业大学，就职于菏泽学院。主要从事微生物学与免疫学的研究。工作以来，共主持和参与项目3项，其中省部级1项，校级2项。以独立作者发表科研论文8篇，其中SCI收录2篇。以独立作者获得菏泽市自然科学优秀学术成果奖1项(二等奖)等。指导学生团队在第五届全国“生泰尔杯”大学生动物医学专业技能比赛荣获一等奖，被评为优秀指导老师。获山东省第五届“超星杯”高校青年教师教学比赛优秀奖等。
精彩内容:
前言白细胞介素18(Interleukine-18,IL-18)是一种多效细胞因子，具有强烈的IFN-γ诱生能力，对机体起着重要的免疫调节和保护作用，在抗微生物感染、抗肿瘤免疫中具有应用潜力，因此IL-18可作为免疫佐剂与一些病原微生物的保护性基因共表达，从而加强疫苗的免疫效果或制备基因工程疫苗；由于鸡IL-18(ChIL-18)基因发现较晚，而对人和哺乳动物IL-18的研究已有许多报道，且其具有与人和哺乳动物相似的生物学功能，因此ChIL-18在比较免疫学研究和禽病治疗中具有重要意义。pFastBacTM Dual载体含有PH启动子和p10启动子，可以同时表达两个具有独立活性的外源蛋白。杆状病毒对脊椎动物无病原性，也不能在脊椎动物细胞内复制、表达，更不能把其基因整合到脊椎动物细胞染色体内，因此重组杆状病毒可以被认为遗传学上安全的表达载体。外源基因因插入多角体蛋白基因的座位引起后者的缺失或灭活，因此重组病毒不产生包涵体，这不仅为重组病毒选择提供了标记，而且重组不能像野生型病毒那样在环境中长期存在，所以更安全。故本研究直接将未纯化的双表达蛋白进行免疫原性研究。传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由IBD 病毒(IBDV)感染雏鸡引起的以淋巴组织，特别是中枢免疫器官——法氏囊为主要特征的高度接触性传染病。该病主要导致机体免疫抑制，使机体的免疫能力降低和疫苗免疫接种失败。虽然灭活疫苗和减毒活疫苗是相当成熟的，但由于IBDV强毒株和抗原变异的出现使其免疫效价降低。VP2 是IBDV的主要保护性抗原，已经鉴定的IBDV中和表位主要在VP2 上，并且多为构象依赖性，这意味着VP2 的立体结构对其中和表位的形成至关重要，与病毒中和抗体的诱导、抗原和毒力的变异以及细胞凋亡的诱导等有关。禽流感(Avian influenza,AI)是由AI病毒(AI
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内容简介:
白细胞介素18(Interleukine-18, IL-18)是一种多效细胞因子，具有强烈的IFN-γ诱生能力，对机体起着重要的免疫调节和保护作用，在抗微生物感染、抗肿瘤免疫中具有应用潜力，因此IL-18可作为免疫佐剂与一些病原微生物的保护性基因共表达，从而加强疫苗的免疫效果或制备基因工程疫苗；由于鸡IL-18(ChIL-18)基因发现得比较晚，而对人和哺乳动物IL-18的研究已有许多报道，且其具有与人和哺乳动物相似的生物学功能，因此ChIL-18在比较免疫学研究和禽病治疗中具有重要意义。pFastBacTMDual载体含有PH启动子和p10启动子，可以同时表达两个具有独立活性的外源蛋白。杆状病毒对脊椎动物无病原性，也不能在脊椎动物细胞内复制、表达，更不能把其基因整合到脊椎动物细胞染色体内，因此重组杆状病毒可以被认为遗传学上是安全的表达载体；外源基因因插入多角体蛋白基因的座位引起后者的缺失或灭活，因此重组病毒不产生包涵体，这不仅为重组病毒选择提供了标记，而且重组不能像野生型病毒那样在环境中长期存在，所以更安全。故本研究直接将未纯化的双表达蛋白进行免疫原性研究。
摘要:
概述一、白细胞介素18的研究进展（一）IL-18的发现1982年，Okmura等发现痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes,Pacnes)与丝裂原LPS合用能显著增加IFN-γ的分泌水平，推测有中介因子参与，但一直未能确定。1989年，Nakamura等从痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes,Pacnes)和细菌脂多糖(LPS)致内毒素休克的小鼠血清中分离出一种具有诱导产生IFN-γ活性的蛋白因子，研究发现，这种因子与IL-12有很多相同之处。1995年，Okamura等发现用Pacnes处理的小鼠再用抗CD3单克隆抗体刺激，可释放高水平的IFN-γ。随后用Pacnes接种小鼠，再用LPS诱导小鼠使其中毒休克，从其肝脏提取液中分离到一种均一多肽，约18KD。根据其中两个多肽片段的氨基酸序列合成寡核苷酸引物，以此为引物用RT-PCR将从小鼠肝脏中提取的mRNA扩增出一个不接近的cDNA片段，作为探针，筛选小鼠肝细胞cDNA文库，得到一全长的cDNA克隆，并在大肠杆菌中表达。因其可诱导IFN-γ产生，命名为γ-干扰素诱导因子(interferon gamma inducing factor,IGIF)(Okamura et al,1995)。1996年，Ushio等用鼠IGIF cDNA作为探针，从正常人肝脏cDNA文库中分离出人的IGIF cDNA。并在大肠杆菌(Ecoli)中表达，鉴于IGIF的氨基酸序列与已知数据库中的任何蛋白质均不相同，并且它除了能诱导IFN-γ产生外还有多种生物学活性，因此重新命名为白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)(Ushio et al,1996)。（二）IL-18的分子结构鼠IL-18(mIL-18)前体蛋白由192个氨基酸组成分子量238ku，N末端有一结构特殊的35个氨基酸组成的信号序列，无N端糖基化位点、无野生型疏水信号肽样位点。成熟mIL-18由157个氨基酸组成，分子量182ku，等电点PI = 49(Okamura et al,1995)。IL-18前体与IL-1β前体相似，没有生物学活性。但两者都有IL-1β转换酶(interleukin-1β-converting enzyme,ICE or Caspase-1)的加工位点天冬氨酸残基(Asp)，ICE可选择性地在特异性的位点切割，使之成为有活性的成熟蛋白(Ghayur,et al,1997;Gu et al,1997;Lorey et al,2004;Nagata et al,2002)。目前认为，小鼠的裂解位点是35Asp- 36Asn，人的IL-1β切割位点是36Asp-37Tyr。实验证明，ICE缺失的小鼠可以生成IL-18前体，但不能将其转换成有活性的IL-18。LPS不能在这种小鼠诱导生成IFN-γ(Fantuzzi et al,1998;Melnikov et al,2001)。另一方面，参与细胞凋
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目录:
概述()一、白细胞介素18的研究进展（）二、鸡IL-18的研究进展（）三、鸡IL-18对传染性法氏囊病疫苗免疫原性提高的研究进展（）四、鸡IL-18对禽流感免疫原性提高的研究进展（）五、鸡IL-18在杆状病毒表达系统中表达的研究进展（）第一章ChIL-18原核表达蛋白复性研究()第一节不同复性方法对rChIL-18原核表达蛋白复性率和生物学活性的影响（）一、材料（）二、方法（）三、结果（）四、讨论（）第二节人工分子伴侣系统辅助rChIL-18原核蛋白复性过程中影响因素的研究（）一、材料（）二、方法（）三、结果（）四、讨论（）第二章rChIL-18原核蛋白及真核表达质粒对IBDV灭活疫苗免疫增强作用的研究()一、材料（）二、方法（）三、结果（）四、讨论（）第三章mChIL-18与IBDV VP2基因或AIV HA1基因在pFastBacTMDual中的共表达及其免疫原性研究()第一节mChIL-18与VP2或HA1在杆状病毒表达载体中的共表达（）一、材料（）二、方法（）三、结果（）四、讨论（）第二节双表达产物pF-IL18-VP2和pF-IL18-HA1的生物学活性检测（）一、材料（）二、方法（）三、结果（）四、讨论（）第三节双表达蛋白pF-IL18-VP2和pF-IL18-HA1的免疫原性研究（）一、材料（）二、方法（）三、结果（）四、讨论（）研究结果()相关文章()参考文献()符号说明()附录()
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