生物化学技术原理及应用 第5版
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作者赵永芳 编
出版社科学出版社
ISBN9787030438058
出版时间2015-03
装帧平装
开本16开
定价88元
货号1202635745
上书时间2024-05-26
商品详情
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目录
第五版前言
第四版前言
第三版前言
编 概述
第一章 生命大分子物质的制备 2
第一节 材料的选择与处理 2
一、材料的选择 2
二、材料的处理 3
第二节 测定方法的确立 4
一、目的与要求 4
二、常用的测定方法 4
第三节 细胞破碎 7
一、机械破碎 7
二、溶胀和自溶 8
三、化学处理 8
四、生物酶降解 8
第四节 抽提 9
一、抽提的含义 9
二、抽提有效成分的影响因子 9
第五节 浓缩 12
一、沉淀法 12
二、吸附法 12
三、超过滤法 12
四、透析法 13
五、离心法 13
六、干燥法 13
第六节 纯化方案的设计与评价 14
一、纯化方案的设计 14
二、纯化方案的评价 15
第七节 有效成分纯度和性质的分析 16
第八节 应用实例 16
一、高纯度人转铁蛋白的制备 16
二、叶绿体的提取与4.5SRNA的制备 16
三、细菌质粒DNA的提取 17
思考题 17
参考文献 17
第二编纯化方法
第二章 沉淀法 20
第一节 基本原理与沉淀类型 20
一、基本原理 20
二、制备蛋白质 20
三、制备核酸 29
第二节 应用实例 32
一、脾磷酸二酯酶的纯化 32
二、细菌染色体DNA的制备 32
三、蔗糖酶的初步纯化 33
思考题 33
参考文献 34
第三章 吸附层析 35
第一节 吸附柱层析 36
一、常用术语 36
二、基本原理 37
三、吸附剂 38
四、洗脱液 41
五、层析柱的制备与层析操作 41
六、应用与实例 43
第二节 薄层层析 45
一、操作及注意事项 46
二、应用实例 51
第三节 聚酰胺薄膜层析 52
一、基本原理 52
二、应用实例 53
思考题 56
参考文献 57
第四章 疏水层析 58
第一节 基本原理 58
一、疏水作用 58
二、吸附剂 59
第二节 操作与应用 59
一、层析柱的制备 59
二、加样与洗脱 60
三、应用实例 60
思考题 62
参考文献 62
第五章 离子交换层析 63
第一节 基本原理 63
第二节 离子交换剂的分类及性质 65
一、分类 65
二、性质 71
第三节 离子交换剂与缓冲液的选择 78
一、离子交换剂的选择 78
二、缓冲液的选择 79
三、加样量的确定 82
第四节 操作 82
一、离子交换剂的处理、再生和转型 82
二、分离物质的交换 83
三、物质的洗脱与收集 84
第五节 应用 86
一、制备、纯化生命物质 86
二、测定蛋白质的等电点 89
思考题 89
参考文献 90
第六章 凝胶过滤 91
第一节 凝胶的分类及性质 91
一、葡聚糖凝胶 92
二、琼脂糖凝胶 94
三、聚丙烯酰胺凝胶 95
四、Sephacryl 96
五、Superdex 97
第二节 基本原理 97
第三节 操作 100
一、凝胶的选择和处理 100
二、凝胶柱的制备 101
三、加样与洗脱 102
四、凝胶柱的再生及保存 106
第四节 应用 106
一、脱盐和浓缩 106
二、分离生命物质 107
三、去除热源物质 108
四、测定分子质量 108
五、其他 111
思考题 111
参考文献 111
第七章 亲和层析 112
第一节 基本原理 112
第二节 操作 114
一、载体的选择 114
二、配体的选择 115
三、亲和吸附剂的制备 116
四、特异性吸附 118
五、分离大分子物质 120
六、亲和层析柱的再生 121
第三节 提高吸附剂的操作容量 121
一、在配体和载体间引入“手臂” 121
二、增加配体取代的程度 123
三、配体与载体衍生物以最少的键连接 123
四、载体多孔性的影响 123
五、其他 124
第四节 应用实例 124
一、纯化大分子物质 124
二、研究酶的结构与功能 127
三、实例 128
思考题 131
参考文献 131
第八章 聚焦层析 132
第一节 基本原理 132
一、多缓冲剂和多缓冲交换剂 132
二、聚焦层析原理 133
第二节 操作 136
一、多缓冲剂的选择 136
二、多缓冲交换剂用量的确定 136
三、多缓冲交换剂的处理 137
四、样品的准备 137
五、加样和洗脱 137
六、样品中多缓冲剂的去除 138
第三节 应用 138
一、分离模型蛋白质 138
二、分离复杂物质 139
三、鉴定某些酶的性质 140
思考题 141
参考文献 141
第九章 高效液相色谱 142
第一节 基本原理 143
一、高效液相色谱仪 143
二、固定相 145
第二节 反相高效液相色谱 148
一、固定相、流动相和色谱柱 149
二、纯化糖基化白蛋白肽片段 151
第三节 应用 153
一、定性和定量分析 153
二、测定酶活性 154
三、测定蛋白质分子质量 154
四、分离核酸和蛋白质 155
思考题 160
参考文献 160
第十章 固定化的酶与微生物 161
第一节 制备方法 162
一、固定化酶 162
二、固定化微生物 165
三、生物传感器 166
第二节 制品的性质 167
一、酶的相对活性 167
二、活性曲线与最适pH 168
三、稳定性 169
四、米氏常数 170
五、其他 170
第三节 应用实例 171
一、工业方面 171
二、医学方面 174
三、生化分析方面 175
四、应用实例 177
思考题 179
参考文献 179
第三编鉴定方法
第十一章 标记 182
第一节 核酸标记 182
一、基本原理 182
二、标记方法 183
第二节 蛋白质标记 189
一、机制 190
二、类型 190
三、标记物制备 191
第三节 标记物的纯化与鉴定 195
一、标记物纯化 196
二、探针的鉴定 197
第四节 应用实例 201
一、cDNA组学和蛋白质组学 201
二、激酶的磷酸化和脱磷酸化 205
三、蛋白质半衰期的测定 206
思考题 207
参考文献 207
第十二章 重组DNA 208
第一节 重组DNA的部件 208
一、工具酶 208
二、载体 211
三、目的基因 213
第二节 重组 218
一、黏性末端连接法 219
二、平端连接法 220
三、平黏连接法 221
四、TGA连接法 221
五、同聚物加尾连接法 221
六、人工接头连接法 221
第三节 DNA扩增 223
一、重组DNA导入宿主细胞 223
二、重组子的筛选与鉴定 225
三、表达产物的纯化 227
第四节 应用实例 227
一、分离总RNA和mRNA 228
二、反转录合成链cDNA 228
三、PCR扩增及其产物纯化 228
四、PCR产物的克隆 229
五、重组质粒的提取及分析 229
思考题 230
参考文献 230
第十三章 DNA序列测定 231
第一节 双脱氧链终止法 231
一、基本原理 231
二、载体系统 232
三、测序试剂 236
四、测序操作 238
五、变性电泳 241
六、序列读取 242
第二节 PCR法 242
一、直接测序 243
二、循环测序 244
三、应用实例 245
第三节 化学降解法 246
一、测序原理 246
二、具体操作 247
第四节 新一代测序法 250
一、第二代测序法 250
二、第三代测序法 252
思考题 253
参考文献 253
第十四章 生物芯片 254
第一节 基因芯片 254
一、基本原理和工作流程 254
二、制备及操作 257
三、应用实例 262
第二节 蛋白质芯片 267
一、原理及特点 267
二、制备与操作 268
三、应用实例 270
第三节 芯片实验室 273
一、结构与制作 273
二、应用实例 276
思考题 282
参考文献 282
第十五章 聚合酶链反应 283
第一节 基本原理及操作系统 283
一、扩增DNA 283
二、扩增RNA 290
第二节 PCR的类型 294
一、普通PCR 294
二、原位PCR 295
三、反转录PCR 295
四、反
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