医学科研型研究生常用实验技术与方法

联合国教科文组织将医学科研活动分为基础研究、应用研究、试验发展三大类，三者之间的非线性互动和交融关系已愈来愈引起重视，并涉及理念的转变，如ABC原则（基础研究与应用研究结合）和SED原则（科学、工程与设计融合）等。无论是基础医学还是临床医学，当前各学科的研究都体现出交叉与整合局面。现代生物医学技术发展日新月异，基础知识与相关研究不断拓宽。但医学科研课题的研究有其原则与规律，目前各类实验方法仍基本围绕“DNARNA蛋白质”中心法则这条线上的三个点，以体内实验、离体实验、体外实验的实验系统，运用细胞生物学、实验动物学、生理生化与分子生物学等技术为基础而拓展。
医学科研型研究生需要接受基础技术的系统培训，才能胜任今后的科研工作。有鉴于此，在充分了解学生的实验需求基础上，科研技术人员发挥专业特长，编写了《医学科研型研究生常用实验技术与方法》。本书分为实验室通识、常用实验技术和专题研究方法三大部分，共22章，可供需要开展科研实验的医学硕士生、博士生和从事基础生物医学研究的教师、医师，以及学有所长的本科生学习。
本书以“常用、基本”为原则，所述常用技术相当于科研实验的基本功，对于医学研究生而言，掌握这些常用技术可基本够用；学会这些技术，大部分医学科研实验能顺利完成。但还有许多技术，如电生理技术，未收入本书中，实验者在应用前需要有针对性地学习。
限于篇幅，本书涉及的实验原理描述尽量简明扼要，而力求实用可操作性；也主要叙述生物医学基础研究，不涉及人体受试者研究。在编写过程中，由章喻、魏元基、李峻昊、张孙正远进行了校对工作，在此表示衷心感谢。由于生物医学许多概念与内容在不断地更新，编者深感自己知识与能力有限，很多方面有不足与欠缺，甚至有错漏之处，敬请专家与读者指正。

编者2021年5月

本书是在充分了解医学科研型研究生的实验需求基础上，由科研技术人员发挥专业特长所编写。分为三大部分，共22章。部分为实验室通识，包括现代生物医学基础研究的模式和方法、实验室生物安全、科研实验记录书写要求与规范和实验用水、溶液与缓冲液；第二部分为常用实验技术，包括细胞培养常用实验技术、常用实验动物基本知识与操作、蛋白质含量测定和酶联免疫吸附试验、PCR的原理及应用、蛋白质免疫印迹技术原理与操作、免疫细胞与组织化学技术、流式细胞术、分子克隆技术、基因修饰小鼠技术原理、中药有效成分提取分离及干燥技术等；第三部分为专题研究方法，包括细胞凋亡检测常用方法、细胞自噬检测方法、外泌体研究方法、骨代谢生物学研究方法、高效液相色谱在中药研究中的应用、中药网络药理学及常用数据库简介、组学研究方法、动物与细胞实验的系统评价与Meta分析等。

戴薇薇，博士，中西医结合生物化学专业，上海中医药大学副教授，龙华医院科技中心实验室主任，从事实验室管理与研究生科研实验教学工作，中医药延缓衰老与防治老年病机制研究。

部分·实验室通识001

章·现代生物医学基础研究的模式和方法002
一·现代生物医学研究的模式002
二·生物医学基础研究的三种实验系统003
三·围绕“分子生物学中心法则”展开的实验方法体系004

第二章·实验室生物安全006
一·实验室生物安全概念006
二·实验室安全制度管理007
三·实验室化学废弃物的处理010
四·实验室意外事故应急预案012

第三章·科研实验记录书写要求与规范017
一·实验记录的意义017
二·实验记录的原则017
三·实验记录书写规范要求019

第四章·实验室用水，溶液与缓冲液020
一·实验室用水020
二·溶液022
三·溶液的浓度023
四·缓冲溶液026
五·常用缓冲溶液的配制029
六·中药复方和中药单体浓度的计算033

第二部分·常用实验技术035

第五章·细胞培养常用实验技术036
一·原代细胞分离与培养036
二·细胞传代039
三·细胞冻存及复苏042
四·细胞计数045
五·细胞活力检测047
六·细胞转染050
七·常用细胞培养基比较052

第六章·常用实验动物基本知识与操作053
一·实验动物概念053
二·实验动物分类053
三·常规实验动物设施分类和使用056
四·常用实验动物生物学特征057
五·实验动物福利059
六·实验动物基本操作060
七·常用实验动物麻醉操作067
八·实验动物血液标本采集070
九·实验动物其他标本采集073
十·实验动物的尸体剖检和脏器采出075

第七章·蛋白质含量测定和酶联免疫吸附试验077
一·蛋白质含量测定077
二·免疫标记技术与酶联免疫吸附试验079

第八章·PCR的原理及应用083
一·PCR技术083
二·实时荧光定量PCR的原理及应用091
三·miRNA的PCR检测100

第九章·蛋白质免疫印迹技术原理与操作103
一·蛋白质免疫印迹技术原理103
二·蛋白质免疫印迹具体操作步骤110
三·内参抗体的选择114
四·蛋白质免疫印迹实验中的注意事项与常见问题分析114

第十章·免疫细胞与组织化学技术117
一·样本组织制备117
二·组织脱钙119
三·组织切片制作与染色技术120
四·特殊染色技术123
五·免疫组织化学技术127
六·免疫组织化学染色中常见的问题及对策133
〖KG18mm〗〖CSX%0,0,0,30〗〖CD130mm〗〖CSX〗

第十一章·流式细胞术原理、操作与实验中的应用135
一·流式细胞术概述135
二·流式细胞术的原理136
三·流式细胞术的基本操作143
四·流式细胞术的应用152

第十二章·分子克隆原理与技术操作160
一·分子克隆的基本工具160
二·目标DNA序列的PCR法克隆和酶切法亚克隆164
三·质粒和PCR产物的酶切及琼脂糖凝胶电泳167
四·质粒酶切或PCR产物酶切后的纯化和割胶回收169
五·T4 DNA连接酶介导的质粒和PCR产物的连接反应171
六·质粒的转化、扩增、抽提与鉴定173

第十三章·基因修饰小鼠技术原理177
一·基因编辑概述177
二·Cre／LoxP系统178
三·TALEN系统181
四·CRISPR／Cas9基因编辑系统184

第十四章·中药有效成分提取分离及干燥技术187
一·中药成分的提取方法187
二·中药有效成分的分离方法189
三·中药复方有效成分的提取分离191
四·中药提取液的浓缩方法192
五·中药提取液干燥方法及冷冻干燥技术193

第三部分·专题研究方法197

第十五章·细胞凋亡检测常用方法198
一·细胞凋亡的概念198
二·常用的检测方法198

第十六章·细胞自噬检测方法206
一·细胞自噬概述206
二·自噬的检测方法208
三·细胞自噬检测方法小结217

第十七章·外泌体研究方法219
一·外泌体概述219
二·外泌体的常用提取方法220
三·外泌体的鉴定225
四·外泌体的研究策略227

第十八章·骨代谢生物学研究方法230
一·骨代谢概述230
二·骨组织细胞学和分子生物学230
三·骨代谢细胞生物学研究方法235
四·骨代谢组织生物学研究方法238

第十九章·高效液相色谱在中药研究中的应用242
一·高效液相色谱简介242
二·高效液相色谱仪介绍及使用方法244
三·高效液相色谱法测定中药成分方法的建立246

第二十章·中药网络药理学及常用数据库简介248
一·中药网络药理学及其研究思路248
二·中药网络药理学常用数据库简介251

第二十一章·蛋白质组学、代谢组学技术研究方法266
一·蛋白质组学及其应用266
二·代谢组学及其应用272

第二十二章·动物与细胞实验的系统评价与Meta分析279
一·动物与细胞实验系统评价的现状与意义279
二·动物与细胞实验系统评价的基本过程280
三·动物与细胞实验的检索策略的制定283
四·动物和细胞实验的偏倚风险评估287
五·数据分析291

本着常用、基本的编写原则，让医学研究生掌握科研实验的基本功，顺利完成学业