生物化学实验指导教程

生物化学作为生命科学的核心，是生物科学、生物工程与技术、食品、医药和农业（包括水产养殖学）等相关专业的基础课程，是进一步学习其他相关课程的基础知识。生物化学实验是生物化学教学的重要组成部分，是贯穿理论联系实际、培养学生动手能力和科学作风的重要环节，因此，生物化学实验也被作为基础核心课程列入了高等院校生命科学各专业的教学计划中，并且实验课单独作为一门课程开设。

随着生物化学技术的发展，目前已出版的生物化学实验教材种类繁多，包含的实验内容也更加广泛，但其中会有一些与其他实验课程的重复，或者在本科实验教学课堂中不易实现的实验项目。本书在编写中，突出基础实验，配合综合实验，实验内容简明、实用。强调了最基本的实验原理、技术和方法，部分实验加入了课堂教学的实验结果作为参考。实验中尽量选用简单易得的材料和试剂，并且每个实验详细列出了所需的仪器、材料和试剂及配制方法等，不仅可以作为实验教材供教学使用，也可以为学生毕业论文实验和自主实验等开放性实验提供详细参考。

全书共38个实验项目，包括糖类的检测和分析、脂类的提取和检测、蛋白质的分离制备与检测分析、核酸的分离提取及检测、酶的性质研究及活力测定、维生素含量检测等。附录部分包含了生物化学实验室常用的基本实验操作方法、常用仪器使用方法和一些常见试剂的配制参考。另外还加入了与实验内容相对应的习题集，并附有参考答案。本书适合作为普通高等院校各类理工科专业的生物化学实验课教材或参考书。

衷心感谢所有参编人员为本教材编写付出的艰辛努力，以及所在单位的各级领导和有关部门的热情鼓励和支持。由于生物化学实验技术发展迅速，内容涉及广泛，加之编者水平和经验有限，本书难免存在不足之处，敬请使用本书的师生和其他读者批评指正。

全书分为基础实验、综合实验和附录三个部分。共38个实验项目，包括糖类的检测和分析、脂类的提取和检测、蛋白质的分离制备与检测分析、核酸的分离提取及检测、酶的性质研究及活力测定、维生素含量检测等。附录部分包含了生物化学实验室常用的基本实验操作方法，常用仪器使用方法和一些常见试剂的配制参考。另外还加入了与实验内容相对应的习题集，并附有参考答案。部分实验结果中加入了图片资料，供实验中参考。

    本书适合作为普通高等院校各类理工科专业的生物化学实验课教材或参考书。

全书分为基础实验、综合实验和附录三个部分。共38个实验项目，包括糖类的检测和分析、脂类的提取和检测、蛋白质的分离制备与检测分析、核酸的分离提取及检测、酶的性质研究及活力测定、维生素含量检测等。附录部分包含了生物化学实验室常用的基本实验操作方法，常用仪器使用方法和一些常见试剂的配制参考。另外还加入了与实验内容相对应的习题集，并附有参考答案。部分实验结果中加入了图片资料，供实验中参考。

 本书适合作为普通高等院校各类理工科专业的生物化学实验课教材或参考书。

徐丹丹，内江师范学院讲师，讲授课程主要包括《生物化学》《生物化学实验》和《分子生物学实验》等课程。主要从事动物生理生化、分子生物学相关教学和科研工作；参研了多项国 家 级和省部级项目，主持了6项纵、横向课题（其中生物化学实验教学改革项目2项）。先后在《PLOS one》《Mitochondrial DNA Part B》《水产学报》《水生生物学报》《长江流域资源与环境》和《淡水渔业》等期刊上公开发表论文近10余篇，其中第 一作者或通讯作者论文8篇（SCI 论文2篇）；成功申请实用新型专利2项，近3年来，指导本科生成功申报大学生创新创业项目2项（国 家 级1项，省级1项），指导学生荣获2018年“创青春四川青年创新创业大赛”铜奖1项。

第一篇基础实验/1

实验一糖类的颜色反应1

一、α-萘酚反应（Molisch反应）1

二、间苯二酚反应（Seliwanoff反应）3

实验二糖类的还原作用5

实验三蒽酮比色法测定总糖含量8

实验四还原糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法11

实验五邻甲苯胺法测定血糖14

糖类习题集16

实验六脂肪的粗提和定量测定18

实验七脂肪碘值的测定20

实验八脂肪的组成23

实验九卵磷脂的提取和鉴定26

实验十血清胆固醇的定量测定（醋酸酐法）28

脂类习题集30

实验十一蛋白质的性质实验——蛋白质及氨基酸的呈色反应32

一、双缩脲反应32

二、茚三酮反应34

三、黄色反应36

四、考马斯亮蓝反应38

实验十二蛋白质等电点的测定和蛋白质的沉淀反应40

一、蛋白质等电点的测定40

二、蛋白质的沉淀与变性42

三、尿蛋白定性检验46

实验十三酪蛋白的提取49

实验十四考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）测定蛋白质的浓度51

实验十五蛋白质含量测定——微量凯氏定氮法54

实验十六双缩脲法测定蛋白质含量59

实验十七福林-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质61

实验十八血清蛋白质乙酸纤维素薄膜电泳63

实验十九垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质67

实验二十SDS-PAGE电泳测定蛋白质分子量69

实验二十一蛋白质DNS分析法(DNS-Cl膜色谱技术)73

蛋白质的结构与功能习题集75

实验二十二哺乳动物基因组DNA的提取78

实验二十三植物基因组DNA的提取81

实验二十四应用PCR技术扩增DNA分子84

实验二十五DNA的琼脂糖凝胶电泳87

实验二十六酵母RNA的分离与组分鉴定91

核酸的结构与功能习题集93

实验二十七酶的特性96

一、温度对酶活力的影响96

二、pH对酶活力的影响98

三、唾液淀粉酶的活化和抑制100

四、酶的专一性102

实验二十八肝脏中转氨酶活力的测定106

实验二十九过氧化氢酶和过氧化物酶的作用109

实验三十碱性磷酸酶的分离与纯化112

酶类习题集114

实验三十一维生素C的定量测定——2,4-二硝基苯肼法119

实验三十二维生素A的定性测定123

实验三十三维生素B1的定性测定125

实验三十四胡萝卜素的定量测定127

维生素习题集129

第二篇综合实验/131

实验三十五小麦萌发前后淀粉酶活力的比较131

实验三十六酵母蔗糖酶的提取、纯化及效果分析135

实验三十七脲酶的分离纯化及酶学特性研究139

实验三十八大肠埃希菌质粒DNA的提取、酶切和琼脂糖凝胶电泳鉴定154

附录/159

一、实验室基本操作159

（一）玻璃仪器的洗涤159

（二）一些常用的清洗液159

（三）溶液的混匀160

二、常用仪器的使用和注意事项161

（一）移液器161

（二）电子天平162

（三）离心机163

（四）酸度计164

（五）紫外分光光度计166

三、试剂的配制及其分级168

（一）试剂配制的注意事项168

（二）几种常用缓冲液的配制169

（三）常用酸碱指示剂174

四、习题参考答案176

全书分为基础实验、综合实验和附录三个部分。共38个实验项目，包括糖类的检测和分析、脂类的提取和检测、蛋白质的分离制备与检测分析、核酸的分离提取及检测、酶的性质研究及活力测定、维生素含量检测等。附录部分包含了生物化学实验室常用的基本实验操作方法，常用仪器使用方法和一些常见试剂的配制参考。另外还加入了与实验内容相对应的习题集，并附有参考答案。部分实验结果中加入了图片资料，供实验中参考。

    本书适合作为普通高等院校各类理工科专业的生物化学实验课教材或参考书。

徐丹丹，内江师范学院讲师，讲授课程主要包括《生物化学》《生物化学实验》和《分子生物学实验》等课程。主要从事动物生理生化、分子生物学相关教学和科研工作；参研了多项国 家 级和省部级项目，主持了6项纵、横向课题（其中生物化学实验教学改革项目2项）。先后在《PLOS one》《Mitochondrial DNA Part B》《水产学报》《水生生物学报》《长江流域资源与环境》和《淡水渔业》等期刊上公开发表论文近10余篇，其中第 一作者或通讯作者论文8篇（SCI 论文2篇）；成功申请实用新型专利2项，近3年来，指导本科生成功申报大学生创新创业项目2项（国 家 级1项，省级1项），指导学生荣获2018年“创青春四川青年创新创业大赛”铜奖1项。