海洋贝类免疫学实验技术

前言

*章 海洋贝类实验材料、免疫刺激和样本收集

?*节 扇贝的暂养、饲喂、免疫刺激及样品采集方法

?第二节 牡蛎的暂养、饲喂、免疫刺激及样品采集方法

第二章 基于核酸的实验方法

?*节 基于蛋白酶K法的海洋贝类基因组DNA制备

?第二节 基于Trizol类试剂的海洋贝类总RNA提取

?第三节 核酸的琼脂糖凝胶电泳

?第四节 用于qPCR和RACE的cDNA合成及加尾反应

?第五节 常规PCR技术和RACE技术

?第六节 基于SYBR Green的实时荧光定量PCR技术

?参考文献

第三章 基于蛋白质的实验方法

?*节 原核重组表达系统的选择

?第二节 重组质粒的构建

?第三节 基于IPTG的原核表达

?第四节 GST标签蛋白纯化

?第五节 His标签蛋白的变性纯化（镍琼脂糖凝胶FF柱）

?第六节 His标签蛋白非变性纯化

?第七节 MBP标签蛋白纯化

?第八节 SDS-聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳

?第九节 蛋白质的透析复性

?第十节 基于BCA法的蛋白浓度测定

?第十一节 基于Bradford法的蛋白浓度测定

?第十二节 小鼠多克隆抗体制备

?第十三节 免疫印迹法

?第十四节 凝胶迁移实验

?参考文献

第四章 免疫组化相关实验方法

?*节 血淋巴细胞滴片及组织石蜡切片的制备

?第二节 基于血淋巴细胞滴片及组织石蜡切片的免疫荧光技术

?第三节 扇贝和牡蛎胚胎整体免疫荧光

?参考文献

第五章 免疫活性相关实验方法

?*节 抗菌*菌活性测定

?第二节 凝菌活性测定及其抑制实验

?第三节 凝血活性测定

?第四节 细胞包囊化活性测定

?第五节 基于ELISA的PAMPs结合活性测定

?第六节 RNA干扰技术

?参考文献

第六章 免疫指标相关实验方法

?*节 基于FITC荧光法测定细胞吞噬活性

?第二节 细胞凋亡水平检测

?第三节 新生循环血细胞数目检测

?第四节 一氧化氮合成酶活性测定

?第五节 总一氧化氮含量测定

?第六节 酚氧化酶活性测定

?参考文献

第七章 基于细胞的相关实验方法

?*节 基于Leibovizs L-15培养基的贝类原代细胞培养

?第二节 哺乳动物细胞传代培养

?第三节 哺乳动物细胞瞬时转染

?第四节 报告基因表达实验

?第五节 基于DAPI/Hochest 33258的细胞核染色

?第六节 基于DiI的细胞膜染色

?参考文献

本书介绍了海洋贝类免疫学基础及其实验技术特点，在此基础上，以扇贝、牡蛎为例，展开论述了海洋贝类实验材料、免疫刺激和样本收集；基于核酸的实验方法(包括基于蛋白酶K法的海洋动物基因组DNA制备等)；阐述了基于蛋白质的实验方法(包含原核重组表达系统的选择等)；接下来论述了免疫组化相关实验方法(包括血淋巴细胞滴片及组织石蜡切片的制备等)；阐述了免疫活性相关实验方法(包括抗菌抑菌活性测定等)；论述了免疫指标相关实验方法(包括基于FITC荧光法测定细胞吞噬活性等)；最后阐述了基于细胞的相关实验方法(包括基于Leiboviz'sL-15培养基的贝类原代细胞培养等)。