基孔肯雅病毒理论与实验技术指南 （新加坡）J.朱江昂等主编；刘红旗主译

图书标准信息

• 作者 [新加坡]J.朱江昂 主编；刘红旗 主译
• 出版社 科学出版社
• 出版时间 2023-02
• 版次 1
• ISBN 9787030739605
• 定价 198.00元
• 装帧 平装
• 开本 16开
• 纸张 胶版纸
• 页数 293页
• 字数 403.000千字

【内容简介】

本书为HumanaPress出版的“分子生物学方法”（MethodsinMolecularBiology）系列丛书之一，原书作者都是相关领域的专家，针对基孔肯雅病毒研究相关的实验技术方法，以标准操作规程（SOP）的体例，从基本概念、实验原理到具体操作步骤，进行了详尽描述。本书内容涵盖了临床和诊断病毒学、细胞和病毒培养实验技术及细胞应答研究中的生物信息学与蛋白质组学方法、免疫学和动物模型研究、抗病毒药物和疫苗研发。

【目录】

目录

第一部分　临床和诊断病毒学　

第一章　基孔肯雅病毒进化和流行病学　3　

1.1　引言　3　

1.2　病毒的传播循环和媒介　3　

1.3　病毒的历史和起源　4　

1.4　2004年以来基孔肯雅病毒的流行病学和感染传播情况　5　

1.5　基孔肯雅病毒在西半球的感染情况　6　

1.6　结语　7　

参考文献　7　

第二章　基孔肯雅病毒分子流行病学　10　

2.1　引言　10　

2.2　材料　12　

2.2.1　病毒RNA的提取　12　

2.2.2　一步法反转录-聚合酶链反应（One-step RT-PCR）　12　

2.2.3　聚合酶链反应（PCR）产物的琼脂糖凝胶电泳和纯化　13　

2.2.4　测序反应　13　

2.2.5　PCR测序产物的纯化　13　

2.3 方法　14　

2.3.1　病毒RNA的提取　14　

2.3.2　一步法RT-PCR　14　

2.3.3　琼脂糖凝胶电泳和纯化PCR产物　14　

2.3.4　测序反应　15　

2.3.5　纯化循环测序产物　15　

2.3.6　测序数据编辑　16　

2.3.7　系统发育树的构建　16　

2.4　注释　16

参考文献　17

第三章　高级遗传方法学在基孔肯雅病毒进化和传播追踪溯源研究中的应用　19　

3.1　引言　19　

3.2　材料　20　

3.3　方法　20　

3.3.1　序列生成　21　

3.3.2　从公共数据库获得序列　21　

3.3.3　多序列比对　21　

3.3.4　序列多态性和基因突变分析　22　

3.3.5　中值连接进化网络的构建　23　

3.3.6　生成一个时间尺度的贝叶斯系统发育树，并通过BEAST软件包计算目标序列到*近的共同祖先的时间（tMRCA）以确定祖先的年代　24　

3.3.7　BEAST跟踪输出的可视化　26　

3.3.8　用BEAST系统发育树输出方式构建*大分支可信度树　27　

3.3.9　一致*大分支可信度树的可视化　27　

3.3.10　通过BEAST2软件进行系统地理学分析来确定病毒株时空传播特点　27　

3.3.11　用SPREAD软件使系统地理学输出可视化　29　

3.4　注释　29

参考文献　32

第四章　基于合成肽的抗体检测方法诊断有无神经系统并发症的基孔肯雅病毒感染　34　

4.1　引言　34　

4.2　材料　35　

4.2.1　单向电泳　35　

4.2.2　双向电泳　36　

4.2.3　电洗脱　37　

4.2.4　液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析　37　

4.2.5　多肽合成　37　

4.2.6　酶联免疫吸附试验（ELISA）　38　

4.3　方法　38　

4.3.1　单向电泳　38　

4.3.2　双向电泳　39　

4.3.3　电洗脱　41　

4.3.4　蛋白液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析　41　

4.3.5　多肽合成41　

4.3.6　酶联免疫吸附试验（ELISA）　42　

4.4　注释　43

参考文献　44

第五章　E2糖蛋白在Sf9昆虫细胞的表达和纯化及其在血清学中的应用　45　

5.1　引言　45　

5.2　材料　46　

5.2.1　昆虫表达组件的构建　47　

5.2.2　Sf9细胞的维持及E2糖蛋白的瞬时表达　47　

5.2.3　在昆虫细胞中稳定表达E2糖蛋白　47　

5.2.4　稳定表达细胞的冻存　48　

5.2.5　自然分泌CHIKV-E2的纯化　48　

5.2.6　基孔肯雅病毒的血清学诊断　48　

5.3　方法　48　

5.3.1　构建昆虫表达组件　48　

5.3.2　Sf9细胞的维持和E2糖蛋白的瞬时表达　49　

5.3.3　E2糖蛋白在昆虫细胞中的稳定表达　50　

5.3.4　稳定细胞的低温保存　51　

5.3.5　纯化自然分泌的CHIKV-E2蛋白　51　

5.3.6　CHIKV的血清学诊断　52　

5.4　注释　53

参考文献　54

第六章　基于血清学工具的CHIKV感染诊断方法　55　

6.1　引言　55　

6.2　材料　60　

6.3　方法　61　

6.3.1　血清样品的准备　61　

6.3.2　血清和病毒混合液的准备　62　

6.3.3　细胞培养　62　

6.3.4　用中和过的病毒感染细胞　62　

6.3.5　计算结果　62　

6.4　注释　62

参考文献　63

第七章　使用咽拭子及尿液标本诊断基孔肯雅病毒感染及其评价　65　

7.1　引言　65　

7.2　材料　66　

7.2.1　病毒检测　66　

7.2.2　ELISA检测IgM抗体　66　

7.2.3　体外病毒分离　67　

7.2.4　体内病毒分离　67　

7.3　方法　67　

7.3.1　通过分子生物学技术和测序分析检测病毒基因组　67　

7.3.2　IgM抗体捕获-ELISA血清学检测　68　

7.3.3　体外病毒分离　69　

7.3.4　体内病毒分离　70　

7.4　注释　70

参考文献　71

第二部分　细胞培养、病毒复制和细胞反应　

第八章　用蚊子细胞扩增基孔肯雅病毒　75　

8.1　引言　75　

8.2　材料　76　

8.2.1　培养C6/36细胞　76　

8.2.2　病毒扩增　76　

8.3　方法　76　

8.3.1　培养C6/36细胞　76　

8.3.2　病毒扩增　77　

8.4　注释　78　

参考文献　79

第九章　基孔肯雅病毒感染的定量分析——病毒蚀斑试验　81　

9.1　引言　81　

9.2　材料　82　

9.3　方法　83　

9.3.1　收集用于蚀斑试验的样本　83　

9.3.2　接种BHK-21细胞于24孔板　84　

9.3.3　蚀斑试验　84　

9.4　注释　86

参考文献　88

第十章　实时RT-PCR检测与定量分析基孔肯雅病毒　90　

10.1　引言　90　

10.2　材料　91　

10.2.1　寡核苷酸序列　91　

10.2.2　病毒RNA提取　91　

10.2.3　常规RT-PCR　91　

10.2.4　PCR产物的琼脂糖凝胶电泳及纯化　92　

10.2.5　体外转录合成cDNA　92　

10.2.6　一步法SYBR Green I实时RT-PCR　92　

10.2.7　一步法TaqMan实时RT-PCR　92　

10.3　方法　92　

10.3.1　病毒RNA提取　93　

10.3.2　体外转录PCR产物的制备　93　

10.3.3　琼脂糖凝胶电泳及PCR产物纯化　93　

10.3.4　体外转录　94　

10.3.5　RNA转录物的纯化　94　

10.3.6　总RNA产量的计算　94　

10.3.7　体外转录RNA拷贝数测定　95　

10.3.8　用于RNA绝对定量的标准品构建　95　

10.3.9　基于SYBR-Green I的实时RT-PCR的绝对定量　95　

10.3.10　基于TaqMan的实时RT-PCR的绝对定量　97　

10.3.11　定量未知样本中CHIKV载量　97　

10.4　注释　98

参考文献　100　

第十一章　伊蚊的基孔肯雅病毒感染　102　

11.1　引言　102　

11.2　材料　103　

11.2.1　含CHIKV的血液（CHIKV血饲）　103　

11.2.2　蚊子感染　103　

11.2.3　从蚊子收集CHIKV　104　

11.2.4　处理采集的蚊子脏器　104　

11.3　方法　104　

11.3.1　准备含病毒的血食物　104　

11.3.2　蚊子感染　105　

11.3.3　采集和处理受感染蚊虫的脏器　106　

11.3.4　处理采集的蚊虫组织器官　108　

11.4　注释　108　

参考文献　109　

第十二章　人工血食物感染蚊虫中CHIKV的分析　111　

12.1　引言　111　

12.2　材料　112　

12.2.1　蚊子的饲养　112　

12.2.2　制备含感染性CHIKV的血食物　113　

12.2.3　感染后蚊子的处理　113　

12.2.4　核酸的检测与定量　114　

12.3　方法　115　

12.3.1　埃及伊蚊和白纹伊蚊群落的饲养　115　

12.3.2　蚊子感染性血饲流程　116　

12.3.3　暴露后蚊子处理：通过分析CPE检测蚊子中的病毒　117　

12.3.4　暴露后蚊子处理：强迫唾液分泌　118　

12.3.5　CHIKV核酸检测与定量　119　

12.4　注释　119

参考文献　121　

第十三章　基孔肯雅病毒生长与荧光标记：免疫荧光法检测基孔肯雅病毒　122　

13.1　引言　122　

13.2　材料　123　

13.2.1　病毒生长　123　

13.2.2　荧光显微镜　123　

13.2.3　使用IFA进行血清学诊断　124　

13.2.4　流式细胞术　124　

13.3　方法　125　

13.3.1　细胞生长　125　

13.3.2　荧光显微镜下确定病毒的生长　125　

13.3.3　应用IFA进行血清学诊断　126　

13.3.4　流式细胞术测定病毒生长　127　

13.4　注释　127　

参考文献　128　

第十四章　用蔗糖密度梯度分离和制备基孔肯雅病毒样本用于透射电镜观察　130　

14.1　引言　130　

14.2　材料　131　

14.2.1　CHIKV的分离与扩增　131　

14.2.2　病毒纯化　131　

14.2.3　负染色和免疫金标记法　132　

14.3　方法　132　

14.3.1　分离CHIKV　132　

14.3.2　CHIKV滴定　133　

14.3.3　大规模扩增CHIKV用于病毒纯化　134　

14.3.4　聚乙二醇（PEG沉淀）纯化病毒　134　

14.3.5　不连续的蔗糖梯度纯化病毒　135　

14.3.6　负染法　136　

14.3.7　免疫胶体金标记　136　

14.4　注释　137　

参考文献　138　

第十五章　酵母双杂交筛选法研究病毒-宿主蛋白的相互作用　139　

15.1　引言　139　

15.2　材料　141　

15.2.1　GAL4 Y2H系统中使用的酵母菌株和质粒　141　

15.2.2　培养基　141　

15.2.3　酵母转化　142　

15.2.4　准备酵母蛋白提取物　143　

15.2.5　BD病毒融合构建物自激活的检测　144　

15.2.6　病毒-宿主相互作用文库的筛选　144　

15.2.7　酵母菌落PCR　144　

15.2.8　多重库质粒的排除　145　

15.2.9　限制性消化排除重复文库质粒　145　

15.