基因工程实验指导

图书标准信息

• 作者 朱旭芬 著
• 出版社 高等教育出版社
• 出版时间 2006-01
• 版次 1
• ISBN 9787040183641
• 定价 18.00元
• 装帧 平装
• 开本 16开
• 纸张 胶版纸
• 页数 211页
• 字数 330千字

【内容简介】

《基因工程实验指导》以基因克隆为主线，选编了35个实验，包含了从核酸与质粒的提取、基因文库构建与筛选、基因分离方法的确定、PCR法获得基因、克隆载体和表达载体的重组、重组子的鉴定，基因的表达到表达产物——蛋白的纯化、鉴定等相关的实验技术内容。同一实验项目提供了多种可供选择的实验方法，并强调指出了实验中的注意事项，还对与实验相关的内容进行了评议。
选编的实验内容衔接紧密，在实际教学时，可以针对不同层次、不同学时数的要求，既可以集中在两个星期连续进行，也可以分成十次实验阶段性完成。为提高教学效率，作者还将实验安排分时段详细列于实验计划表中，便于教师组织实验教学。

【目录】

实验计划表
导论
1基因文库的构建
1—1染色体DNA的提取
1—2总RNA和mRNA的提取
1—3噬菌体DNA的提取
1—4染色体DNA的部分消化
1—5基因组文库的构建
1—6cDNA合成
1—7cDNA文库的构建

2目的基因的获得
2—1PCR扩增及RT—PCR
2—2核酸电泳
2—3核酸探针的标记及检测
2—4核酸探针筛选基因文库

3载体质粒的制备
3—1质粒DNA的提取与纯化
3—2核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定

4扩增质粒的构建
4—1限制性内切酶的酶切反应
4—2凝胶电泳法进行DNA的分离、提纯
4—3DNA片段的体外连接

5重组DNA导入宿主细胞
5—1感受态细胞的制备
5—2重组质粒的转化

6重组子的筛选与鉴定
6—1阳性克隆的筛选
6—2测序与序列同源性分析
6—3Southern印迹

7表达质粒的构建与诱导表达
7—1表达质粒的构建
7—2Northern印迹
7—3外源基因的诱导表达
7—4SDS—PAGE
7—5Western印迹
7—6酶联免疫吸附测定（E1ISA）
7—7蛋白质生物功能测定法

8工程菌的培养与目标产物分离
8—1发酵条件的优化
8—2诱导表达蛋白质的分离沉淀
8—3凝胶过滤层析
8—4离子交换层析
8—5蛋白质浓度的测定
8—6酶活性的测定
8—7分离纯化蛋白的收率计算与保存
参考文献
附录1简写
附录2实验注意事项
附录3如何撰写实验报告
附录4常用的碱基、氨基酸符号及缓冲液
附录5大肠杆菌基因型
附录6培养基与试剂的配制
附录7实验仪器