基因工程——动物细胞制药关键技术 生物科学 王天云 等
基因工程实用宝典
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北京丰台
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作者王天云 等
出版社化学工业出版社
ISBN9787122433237
出版时间2024-01
版次1
装帧平装
开本16
页数388页
字数572千字
定价128元
货号xhwx_1203151566
上书时间2024-11-15
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主编：
1.本书反映了近十年来基因工程的新进展
2.本书汇聚了基因工程的成果与技术
3.内容全面、实用强，基因工程研究领域
目录：
章 动物细胞培养 001
节 动物细胞培养基础知识 002
一、基本概念 002
二、动物细胞培养条件 003
三、动物细胞培养实验室 004
四、无菌技术 006
第二节 动物细胞培养技术 007
一、动物细胞冻存与复苏 007
二、动物细胞传代 009
三、动物细胞悬浮驯化及无血清培养 011
四、动物细胞分批培养 015
五、动物细胞补料分批培养 016
六、动物细胞灌流技术培养 022
第三节 动物细胞生物特分析 025
一、动物细胞生长曲线和倍增时间分析 025
二、动物细胞增殖测定 028
三、动物细胞凋亡检测 031
四、动物细胞周期检测 036
参文献 038
第二章 动物细胞载体 041
节 质粒载体构建 042
一、目的基因获取 042
二、内切酶酶切 046
三、目的片段和载体连接 048
四、重组子转化 050
五、重组载体筛选 052
六、重组载体鉴定 052
第二节 病毒载体构建 056
一、杆状病毒表达载体 056
二、慢病毒载体 057
三、腺病毒载体 059
四、逆转录病毒载体 060
参文献 061
第三章 目的基因导入 065
节 动物细胞转染 066
一、脂质体转染 066
二、聚亚胺转染 067
三、电穿孔转染 068
四、影响细胞转染的因素 069
第二节 细胞转染效率检测 070
一、流式细胞仪检测 071
二、荧光显微镜检测 071
参文献 072
第四章 重组稳定细胞株筛选和评估 075
节 重组稳定细胞池筛选 076
一、常用的抗生素筛选标记 076
二、遗传霉素筛选 078
三、dhfr筛选 079
四、gs筛选 080
第二节 重组单克隆细胞株分离 081
一、有限稀释法 081
二、流式细胞荧光分选技术 082
三、clonepix 083
四、克隆环法 084
五、其他筛选方法 085
第三节 重组稳定细胞系评估 086
一、细胞污染检测 086
二、细胞系鉴定 087
三、外源基因整合分析 089
四、重组蛋白表达分析 098
参文献 101
第五章 重组蛋白分离纯化 103
节 重组蛋白纯化策略及设备 104
一、重组蛋白纯化策略 104
二、重组蛋白纯化设备 107
第二节 重组蛋白沉淀和膜分离技术 116
一、蛋白质沉淀法 117
二、膜分离技术 118
第三节 重组蛋白分离谱技术 119
一、亲和谱法 120
二、疏水谱法 122
三、凝胶过滤谱法 124
四、离子交换谱法 126
五、反相谱法 129
参文献 131
第六章 重组蛋白药物鉴定与分析 135
节 蛋白质理化特 136
一、分子量测定 136
二、等电点与电荷异质分析 141
三、肽图分析 144
四、氨基酸组成分析 145
五、n端氨基酸测序 150
六、c端氨基酸测序 152
七、二硫键分析 153
八、结构分析 155
第二节 蛋白质含量分析 159
一、凯氏定氮法 159
二、lowry法 161
三、bca法 162
四、bradford法 164
五、紫外吸收法 166
六、高效液相谱法 166
第三节 蛋白质纯度分析 168
一、宿主细胞蛋白残留分析 168
二、宿主细胞dna残留分析 170
三、残留抗生素检测 172
四、其他成分检测 173
第四节 糖基化修饰分析 181
一、分离富集亲和技术 182
二、糖蛋白鉴定/糖基化位点的确定方法 187
三、糖链结构分析 189
第五节 生物学活测定 206
一、体外法评估 207
二、体内法评估 211
第六节 疫化学特分析 213
一、亲和力测定 213
二、抗原结合表位测定 217
参文献 219
第七章 重组蛋白药物新技术 223
节 人工智能与蛋白药物设计 224
一、核苷酸及蛋白质相关数据库 224
二、基因信息分析及密码子优化 226
三、蛋白质信息分析及结构预测 241
四、人工智能设计 255
第二节 mirna筛选与应用 269
一、mirna筛选 269
二、mirna应用 273
第三节 基因编辑技术 279
一、动物细胞crispr基因敲除 279
二、动物细胞基因敲入 289
第四节 表观遗传学技术 299
一、dna甲基化分析 299
二、组蛋白修饰分析 305
三、非编码rna分析 314
第五节 dna与蛋白质相互作用分析 323
一、凝胶迁移实验 323
二、dnaseⅰ足迹实验 330
三、酵母单杂交系统 337
四、染质疫沉淀 351
五、噬菌体展示技术（dna与蛋白质相互作用） 354
参文献 356
附录1 常用缓冲液及试剂的配制 363
附录2 中英文词汇表 369
内容简介：
基因工程——动物细胞制药关键技术围绕动物细胞表达系统生产重组蛋白质药物的关键技术，从动物细胞培养、动物细胞载体、目的基因导入、重组稳定细胞株筛选和评估、重组蛋白分离纯化、重组蛋白药物鉴定与分析、重组蛋白药物新技术等方面，详细介绍了该领域的关键技术及新技术。
本书涵盖了动物细胞制药基因工程来的新的关键技术及相关进展，可作为从事生物制药、基因工程等领域工作的科研人员、专业技术人员及相关专业的教师和的参用书。
作者简介：
王天云，博士，教授，博士生导师。新乡医学院“太行学者”特聘教授。河南省重组药物蛋白表达系统国际联合实验室及生物创新药物工程技术研究中心主任，中国生物化学与分子生物学会理事，河南省生物化学与分子生物学会理事长，“长江学者”，科技进步奖评审专家。主持自然科学4项，省重大科技专项1项，创新杰出人才项目1项；参与“863”课题、重大科技专项各1项。获省科技进步2项、1项。申请发明专利35项，已授权16项。发表研究86篇，其中ci收录53篇，被引1076次。长期从事哺乳动物细胞表达系统的研究，建立了国际水的哺乳细胞表达系统，包括高效表达载体、细胞系及培养基。已实现技术转移2项，专利转化8项。
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